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2021年 第38卷 第5期    刊出日期：2021-10-28

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研究报告

通过制度建设推进我国实验动物福利伦理审查工作

刘晓宇, 贺争鸣

2021, 38(5):  1. 

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摘要:尽管我国实验动物福利伦理审查工作已取得很大进展,但实验动物福利伦理委员会( IACUC) 在履行职责时还存在一些问题,包括其法律地位尚未明确、规章制度缺位、能力有待加强和科研人员的重视程度不够等。 借鉴涉及人的生物医学研究伦理审查办法,本文提出 4 点针对性建议:首先,在《条例》中提出实验动物福利伦理工作的管理要求;其次,制定国家层面的实验动物福利伦理审查管理办法;再次,以培训工作为抓手,提升 IACUC 业务能力和审查水平;最后,项目申请和论文发表环节严格要求遵守动物福利伦理要求。 我国亟需建立完善的实验动物福利伦理审查制度,提升相关福利伦理审查工作能力,助力科学技术的发展。

热应激对 ICR 雌性小鼠超数排卵及卵泡发育的影响

田永路, 李娜, 田祯, 曾申明, 朱德生

2021, 38(5):  4. 

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摘要:目的 探讨短期热应激对小鼠超数排卵和卵泡发育的影响。 方法 取超数排卵处理后体质量近似的 7 ~ 8 周龄 ICR 雌性小鼠 20 只,随机分为对照组和热应激组,每组 10 只,饲养于屏障环境内。 热应激组小鼠放入 38 ℃ 的生化培养箱中,热应激处理 10 h,期间自由采食和饮水。 热应激结束后,将小鼠放回屏障设施内饲养,持续 6 d,6 d后,进行超数排卵处理并处死小鼠,获取小鼠输卵管内卵子以及卵巢。 结果 热应激组小鼠超排卵数高于对照组( P<0. 05) 。 对卵巢切片进行苏木素-伊红( HE)染色后,观察发现热应激组小鼠的总卵泡数和黄体数均明显高于对照组( P<0. 01) 。 热应激组小鼠的卵泡闭锁率高于对照组,但无明显差异( P> 0. 05) 。 结论 热应激严重影响小鼠的繁殖机能,尤其是卵泡的发育过程。

Caveolin-1 在肝纤维化中作用的研究

张洁, 杨子衡, 王燕, 孙泉

2021, 38(5):  8. 

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摘要:目的 通过 10%四氯化碳( CCl₄ )橄榄油溶液,分别诱导野生型小鼠和小窝蛋白-1( Caveolin-1) 敲除小鼠建立 肝纤维化模型,比较分析敲除 Caveolin-1 对肝损伤和胶原沉积的影响,揭示其在肝纤维化中的作用。 方法 按剂量 1 μL / g,腹腔注射野生型小鼠和 Caveolin-1 敲除小鼠 10% CCl₄ 橄榄油溶液,2 次 / 周。 注射后,1、3、7、14 和 28 d,分 别处死 5 只小鼠,取血清和肝脏,通过苏木素-伊红( HE) 染色、血清谷丙转氨酶( ALT) 和谷草转氨酶( AST) 水平检测,分析肝脏损伤程度;利用天狼猩红染色、Real-time PCR 及 Western blot 方法,观察肝脏胶原沉积及肝纤维化标志物 α 平滑肌肌动蛋白( α-SMA) 、Ⅰ 型胶原蛋白( collagen-Ⅰ )和Ⅲ 型胶原蛋白( collagen-Ⅲ ) mRNA 及蛋白表达水平, 分析肝纤维化程度。 结果 与野生型小鼠相比,造模后 3 d,敲除小鼠的血清 ALT 和 AST 含量显著升高( P<0. 01) ;3、7 和 14 d,敲除小鼠肝脏坏死面积显著增大( P<0. 01 或 P<0. 05) ;7、14 及 28 d 时,敲除小鼠胶原染色面积明显增多( P<0. 01 或 P<0. 05) ;肝星状细胞活化标志物 α-SMA mRNA 水平在 3 d 和 14 d 时显著升高(P<0. 05),collagen-Ⅰ和collagen-Ⅲ mRNA 在 14 d 时显著上调(P<0. 01);14 d 时,敲除小鼠肝脏 α-SMA、collagen-Ⅰ及 collagen-Ⅲ 蛋白表达水平均显著升高( P<0. 01 或 P<0. 05) 。 结论 Caveolin-1 抑制 CCl₄ 诱导的小鼠肝脏炎性损伤及纤维化。

经皮肺动脉去交感神经冷冻消融术治疗犬肺动脉高压疗效评价

陈浩, 林衔亮, 温福利, 薛来恩, 陈璟, 李林睿, 吴晓娟, 林涯泽, 杨燊

2021, 38(5):  15. 

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摘要:目的 通过野百合碱诱导的犬肺动脉高压模型,观察肺动脉去交感神经冷冻消融术后 6 个月的肺动脉平均压力( mPAP) 、肺毛细血管楔压( PCWP)及内皮素受体-1( ET-1)变化,评估冷冻消融去比格犬肺动脉交感神经的安全性和有效性。 方法 将 15 只比格犬随机分为 A 组(冷冻消融组) 、B 组(假手术组) 及 C 组( 对照组) ,对比观察比格犬手术前后 mPAP、PCWP 及 ET-1 水平变化。 结果 A、B 和 C 各组术后 6 个月,mPAP、PCWP 和 ET-1 值均低于术前水平,差异有统计学意义( P<0. 05) 。 结论 犬肺动脉高压经皮肺动脉去交感神经冷冻消融术安全且有效,术后表现出延续性降肺动脉压力效果。

2017—2019 年北京地区实验动物质量抽检结果分析

魏杰, 黄健, 刘文菊, 付瑞, 邢进, 王洪, 王吉, 李晓波, 冯育芳, 王淑菁, 高强, 王锡乐, 巩薇, 贺争鸣, 李根平, 岳秉飞

2021, 38(5):  19. 

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摘要:目的 比对分析 2017—2019 年北京地区实验动物微生物及遗传质量监测结果,为实验动物产业发展提供参考。 方法 按照国家和地方现行实验动物检测标准,对北京地区实验动物生产单位进行抽检,并发布检测报告。按照报告数据,对此阶段小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬、猴和小型猪共 8 个品种的实验动物按照品种、等级、单位等进行分类,分析质量问题,并与 2014—2016 年同期实验动物质量比对,分析变化趋势。 结果 2017—2019 年分别抽检动物 144、131 和 135 批次,检出不合格批次分别为 30、15 和 17 批。 不合格主要因素为兔、犬及猪免疫不达标(20 批) ,病原感染 20 批,未发现遗传变异。 与 2014—2016 年同期相比,未检出遗传问题相同,免疫不达标状况好转,但病原感染出现上升。 结论 通过质量分析比对,能够为实验动物产业健康发展提供数据支持。

高脂饮食对生长期大鼠体质量和骨质量影响的研究

阎国强, 刘莉莉, 梁震, 任娟, 舒雄, 赵丹慧

2021, 38(5):  28. 

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摘要:目的 研究高脂饮食对生长期大鼠体质量和骨质量的影响。 方法 24 只 21 日龄 SD 大鼠随机分为普食组和高脂组,n = 12,雌雄各半。 两组大鼠分别给予普通饲料和高脂饲料喂养 6 周后,测量体质量以及微计算机断层扫描技术( Micro-CT)扫描右侧股骨,比较两组大鼠体质量和骨质量的变化。 结果 喂养 6 周后,与普食组比较,高脂组大鼠的体质量明显增加,具有统计学差异( P<0. 05) ,且雄性大鼠体质量的增长速度高于雌性;骨密度( BMD) 降低,但仅在雌性大鼠中具有统计学差异( P<0. 05) ;骨体积分数( BV / TV)及骨表面积骨体积比( BS / TV) 降低,具有统计学意义( P<0. 05) ;骨小梁间隙( Tb. Sp)增加,结果具有统计学差异( P< 0. 05) ; 骨表面积体积比( BS / BV) 和骨小梁厚度( Tb. Th)变化不明显,无统计学差异( P>0. 05) 。 结论 高脂饲料喂养的生长期肥胖大鼠,雄性更适合作为肥胖模型动物,而雌性肥胖大鼠更容易出现骨质疏松,形成骨量整体性缺失。

2017—2019 年 CD ( SD)大鼠 240 个 SNP 位点遗传检测结果分析

龙烟朦, 郑天威, 张巧稚, 苗向南, 田军, 尹良宏, 韩雪

2021, 38(5):  32. 

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摘要:目的 2017—2019 年北京维通利华实验动物技术有限公司(以下简称,维通利华) 连续三年参与美国 Charles River Laboratories( CRL)对全球各地设施 CD( SD)大鼠生产群的遗传检测,以评估种群的遗传稳定性、杂交系数及各设施间种群的差异。 方法 从大鼠耳部样品中提取 DNA,使用荧光标记法检测 240 个单核苷酸多态性( SNP ) 基因位点,通过 GenA1Ex6. 5 软件统计分析得到位点多态性( P) 、观测杂合度( Ho ) 、期望杂合度( HE ) 、近交系数( F)和遗传分化系数( FST )等。 结果 位点多态性比例分别为 73. 6% ,76. 9% 和 74. 2% ,遗传具有多样性且保持稳定;杂交系数分别为-0. 02、-0. 06 和-0. 07,符合随机交配特性;遗传分化系数( FST ) 在 0. 05 上下波动。 结论 维通利华的 CD( SD)大鼠种群保持稳定的遗传多样性,符合随机交配方式繁殖,与 CRL 美国基础种群呈低至中等程度的遗传分化,定期的引种措施为保持种群的杂交性和稳定性发挥重要作用。

长链非编码 RNA H19 在多发性骨髓瘤硼替佐米耐药中的作用研究

肖平, 蔡桂程, 陈文婷

2021, 38(5):  37. 

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摘要:目的 探讨长链非编码 RNA H19( lncRNA H19)在多发性骨髓瘤( multiple myeloma, MM)硼替佐米耐药中的作用。 方法 选取我院 2017 年 2 月― 2018 年 12 月治疗的初诊 MM 患者 26 例、硼替佐米化疗缓解 MM 患者 25 例及硼替佐米化疗后耐 药 复 发 MM 患 者 22 例。 siRNA-H19 和 慢 病 毒 转 染 人 多 发 性 骨 髓 瘤 OPM2 细 胞。 荧 光 定 量Real-time PCR 检测 lncRNA H19 表达。 CCK-8 细胞活力检测 OPM2 细胞对硼替佐米敏感性。 结果 对照组、初诊MM 组、缓解 MM 组和耐药 MM 组 lncRNA H19 的 2^{-△ △ Ct} 值分别为(0.107±0. 032) 、(0. 324±0. 067) 、(0. 218±0. 042)和(0. 486± 0. 095 ) , 各 组 间 具 有 显 著 性 差 异 ( P < 0. 01 ) 。 其 中, 初 诊 MM 组 显 著 高 于 对 照 组 和 缓 解 MM 组( P<0. 01) ,耐药 MM 组又显著高于初诊 MM 组( P< 0. 01) 。 对照组、OPM2 / si-H19 组、OPM2 / NC 组、OPM2 / H19 组和 OPM2 / Blank 组 细 胞 的 IC₅₀ 值 分 别 为 ( 17. 86 ± 1. 64 ) nmol / L、 ( 6. 83 ± 1. 05 ) nmol / L、 ( 18. 04 ± 1. 72 ) nmol / L、(31. 14±3. 57) nmol / L 和 ( 17. 75 ± 1. 68) nmol / L。 其 中, 对 照 组、 OPM2 / NC 组 和 OPM2 / Blank 组 无 显 著 性 差 异( P>0. 05) ,OPM2 / si-H19 组硼替佐米 IC50 值显著低于对照组( P<0. 01) ,OPM2 / H19 组硼替佐米 IC₅₀ 值显著高于对照组( P<0. 01) 。 结论 MM 患者 lncRNA H19 显著升高,高表达 lncRNA H19 可能参与了硼替佐米耐药过程。

人参皂苷 Rb1 干预 DSS 诱导结肠炎模型小鼠转录组高通量测序及分析

董建一, 李昶仪, 陈大朋, 王亮, 王福金, 王靖宇, 周子娟

2021, 38(5):  42. 

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摘要:目的 研究人参皂苷 Rb1 干预葡聚糖硫酸钠盐( Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)诱导结肠炎模型小鼠转录组学信息特征。 方法 C57BL / 6 雄性小鼠构建动物模型,将 15 只小鼠分为正常组、模型组和 Rb1 组,每组 5 只。 模型组和 Rb1 组给予 4% DSS 并自由饮水,第 2 天给 Rb1 组 40 mg / kg Rb1 进行干预。 持续 9 d,处死小鼠后,取结肠组织。 利用 Illumina 高通量测序平台分别对三组小鼠结肠组织进行转录组测序。 利用测定的转录组学数据对 Rb1 组和模型组两两比较之后进行重叠分析,筛选差异基因进行 GO 和 KEGG 分析。 结果 Rb1 干预后各项指标均有改善;GO 富集后其有 10 450 个有效差异表达基因得到 GO 注释,其中分子功能占 13. 5% ,生物过程占 68. 73% ,细胞组成占 17. 77% ;富集最显著的前 20 个 KEGG 通路中与 Rb1 干预后密切相关的有钙离子信号通路、神经活动配体-受体相互作用通路以及 cAMP 信号通路。 结论 人参皂苷 Rb1 能够缓解 DSS 诱导结肠炎模型小鼠的症状。 通过构建 Rb1 干预后 DSS 诱导结肠炎模型小鼠结肠组织转录组序列数据库,为以后 Rb1 功能基因的挖掘和参与代谢途径提供数据支撑,为临床应用提供新的思路。

研究简报

舒泰、速眠新Ⅱ 和利多卡因复合麻醉在比格犬开颅手术中的应用

焦昆, 卢静

2021, 38(5):  49. 

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摘要:目的 本实验采用舒泰、速眠新Ⅱ 全身麻醉并配合利多卡因局部浸润麻醉方法,研究其在比格犬开颅手术中的麻醉效果。 方法 麻醉前 15 min 皮下注射阿托品(0. 1 mg / kg) ,麻醉采用静脉注射舒泰( 2 mg / kg) ,同时肌肉注射速眠新Ⅱ (0. 02 mL / kg) ,术部皮下注射 0. 5%利多卡因溶液( 0. 1 mL / kg) 。 检测指标包括麻醉镇痛评分,麻醉前后动物心率、呼吸和体温变化。 结果 1. 利多卡因可以显著增加麻醉镇痛效果;2. 阿托品使犬心率显著增加;3. 复合麻醉方法对犬呼吸和体温有一定影响,但在正常范围内。 结论 此复合麻醉方法安全性较高及麻醉镇痛效果好,可以满足犬开颅手术对于麻醉效果的要求,但对犬的心率影响较大,因此对心率要求较高的实验需谨慎选择。

研究报告

姜黄在啮齿类实验动物标认中的应用

矫建, 张婷婷, 鹿麟, 刘进朋

2021, 38(5):  54. 

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摘要:目的 通过观察姜黄( Curcumae longae rhizoma)乙醇提取液对实验动物皮肤的毒性反应,探讨用姜黄染色标认啮齿类实验动物的可行性。 方法 姜黄粉加入适量 75%乙醇,蘸取上清液标认白化豚鼠,记录随时间而变化的颜色,并用上清液进行多次皮肤刺激性实验、皮肤光毒实验及皮肤变态反应实验。 结果 经姜黄提取液染色标认后第 21 天,动物着色仍清晰可见;皮肤反应评分表明姜黄无明显皮肤刺激性、光毒性及变态反应。 结论 姜黄作为一种传统中药,其黄色食用染料,适用于染色标认啮齿类实验动物。


研究简报

实验用雪貂的饲养管理探析

何滋林, 姚敏桦, 韦涛, 赵博厚, 祁艺新, 纪庆超, 常雯雯, 刘晓东, 隋宏书

2021, 38(5):  59. 

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摘要:实验动物饲养条件能影响动物的生长发育、生理机能和机体代谢,其操作的规范性和可行性会直接影响实验数据的收集及实验结果的真实性和准确性。 雪貂(Mustela putorius furo)呼吸系统的细胞生物学特性与人相似,是一种适合流感及常见肺病研究的理想动物模型,但是目前国内尚无实验室饲养管理雪貂的报道。 通过改善雪貂生活环境、改进饲养方法及完善实验操作,可以使相关实验结果更真实、准确。 本文结合实际操作和相关文献,对实验雪貂的饲养管理和实验操作进行详细综述,以期提供一套规范的标准的雪貂饲养管理和实验操作方案。

探讨药物 GLP 机构中 IACUC 的职能和伦理审查流程

孙昌华, 张艳美, 李水仙, 范治云, 李志坤, 祝清芬

2021, 38(5):  63. 

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摘要:在药物非临床研究( GLP)的认证体系和实验动物的许可管理中,实验动物福利伦理委员会( IACUC) 作为单位内部的监督机构,在实验动物的使用与管理、动物福利的落实、人员职业健康与安全等方面肩负着重要使命,并发挥重要的作用。 本文结合山东省食品药品检验研究院药物安全评价中心 IACUC 在机构中的运行情况,探讨其职能和审查流程,为实验动物机构 IACUC 开展相关工作提供参考。

小鼠电激怒实验中应用研制的智能化电刺激系统提高成模率的探索

王秋静, 鲁金凤, 于小亚, 李天舒, 宋祥福, 安钢

2021, 38(5):  67. 

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摘要:目的 为提高小鼠电激怒模型制备成功率,研制了智能化电刺激系统以满足电激怒实验要求。 方法 电刺激系统由计算机窗口界面输入用户的控制参数,通过计算机系统与 STM32F103 单片机之间的 RS232 通讯,将用户输入的控制参数传入 STM32F103 单片机中,控制高压输出电路输出用户所需高压脉冲到鼠笼电极装置,以此激怒小鼠,并在动物实验中应用。 结果 制备小鼠激怒模型,通过采用计算机设定电刺激参数,使小鼠激怒模型制备的成功率达 90% ,并符合实验动物福利的“3R”原则要求,可以满足氯丙嗪对小鼠抗电激怒实验效果观察。 结论 研制的电刺激系统实现了计算机对刺激参数的智能化控制,技术性能可满足小鼠电激怒实验教学的要求。

研究进展

精神分裂症动物模型的研究进展

王凤娟, 于小亚, 丁瑜, 张金玉, 袁宝, 胡进平

2021, 38(5):  70. 

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摘要:精神分裂症是一种复杂的重性精神病,持续性强。 患者常常无法控制自己的情绪,出现被害妄想、厌世甚至自杀等行为。 建立精神分裂症疾病动物模型能够有助于探索其发病机制,从而优化临床诊断和治疗方法。 本文将从精神分裂症、精神分裂症理想动物模型、精神分裂症现有动物模型等方面进行论述,力求进一步完善精神分裂症动物模型,进而为研究精神分裂症发病机制以及新药的开发提供理论依据。

基于 CRISPR / Cas9 技术构建点突变小鼠概述

刘素丽, 朱云, 武会娟

2021, 38(5):  75. 

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摘要:2013 年 CRISPR( Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) / Cas( CRISPR-associated) 系统证实能够对人的细胞和其他真核细胞进行基因组编辑,现已广泛应用于生物医学领域。 本文对 CRISPR 在点突变小鼠构建中的应 用 进 行 概 述,为 单 向 导 RNA ( single guide RNA, sgRNA) 和 修 复 模 板 单 链 寡 聚 核 苷 酸 ( single-strand oligonucleotide,ssODN)的设计及体外转录、受精卵显微注射、子代鼠的鉴定等提供理论参考。