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2018年 第35卷 第02期    刊出日期：2018-04-28

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研究报告

长爪沙鼠糖尿病模型近交系培育群体生物学特性的初步研究

马兰芝，杜小燕， 尚世臣，崔晓霞， 李迎， 黄 斌，尚玉璞，李桂军，王冬平，陈振文

2018, 35(02):  1. 

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目的 测定长爪沙鼠糖尿病模型近交系培育群体的遗传生化位点标记和生物学特性的基础数据。方法 采用Beckman全自动生化分析仪(CX5)和日本光电全自动血细胞分析仪(MEK-7222K)对17项血液生化和22项血液生理指标进行测定；醋酸纤维板电泳法检测26个生化位点标记；选择F20代种鼠，按照近交系动物生产方式进行繁育，统计分析胎间隔、初生数、离乳数，生长曲线等。结果 血液生理和生化指标之间比较ALP、HDL-C、CRE指标差异极显著(P<0.01)；MCV、MCH、EOS、GLU、TG、LDH指标差异显著(P<0.05)；遗传生化位点标记呈现单一性；初生体质量为2.68～3.38 g，离乳成活率为68.31%,胎间隔时间比较长。3～6周龄体质量增长较快。结论 研究结果为其品系鉴定和生物医学应用提供重要参考资料。

内质网应激对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌组织的作用

王晶晶， 张 杰，卢 静

2018, 35(02):  6. 

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目的 研究内质网应激对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌组织的作用。方法 结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死后心力衰竭(心衰)模型，大鼠随机分为：假手术组、手术组术后2周组、4周组、6周组和8周组，测量各组大鼠的血流动力学指标，用荧光定量PCR方法检测各组大鼠的内质网分子伴侣GRP78蛋白，内质网应激相关凋亡蛋白CHOP、Caspase-12、Caspase-3、Bcl-2在心肌组织中的表达量。结果 与假手术组相比较，手术组大鼠左室收缩压(LVSP)、左室压最大上升和下降速率(±dp/dt max)明显低于假手术组(P≤0.05 或 P≤0.01)；左室舒张末压(LVEDP)则高于假手术组(P≤0.05)。手术组大鼠心肌组织中GRP78、CHOP、Caspase-12、Caspase-3的表达量随术后饲养时间的增长而增高(P<0.05或P≤0.01)，且表达量与术后饲养时间呈正相关(P≤0.01)；心肌组织中Bcl-2的表达量随术后饲养时间的增长逐渐降低(P≤0.01)，表达量与术后饲养时间呈负相关(P≤0.01)。结论 内质网应激激活了相关的细胞凋亡通路，使得心肌细胞凋亡。

cn3b在遗传性糖尿病长爪沙鼠多种组织中的表达情况

赵培琨，龚菁菁，杜小燕，李长龙，霍学云，路静，吕建祎，刘 欣，陈振文，郭萌

2018, 35(02):  11. 

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目的 比较正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏、肾脏、骨骼肌和脑组织中钠通道β亚基(sodium channel beta subunit 3 gene，Scn3b)的表达差异。方法 选取正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠各6只，分别采集动物的肝脏、肾脏、骨骼肌和脑组织，利用Real-time PCR和Western blotting检测Scn3b在各组织中的mRNA和蛋白表达水平。结果 与正常血糖动物相比，在糖尿病长爪沙鼠肝脏和脑组织中，Scn3b mRNA和蛋白水平表达均下降，其中在肝脏具显著性差异。结论 Scn3b在糖尿病长爪沙鼠肝脏和脑组织中表达减少，提示在肝脏和脑组织中Scn3b的异常表达可能参与长爪沙鼠糖尿病的发生。

STR扫描技术对融水小型猪群体遗传结构的分析*

刘 科， 施赫赫，谭巧燕，陈淦， 唐小江

2018, 35(02):  16. 

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目的 应用STR扫描技术分析融水小型猪群体的遗传结构。方法 选用北京市地方标准封闭群实验用小型猪的遗传质量监测提供的25个微卫星位点对广东省医学实验动物中心小型猪研究基地F1代30头融水小型猪基因组DNA进行PCR扩增，对扩增产物进行STR扫描，运用popgene32软件对该融水小型猪进行群体遗传结构分析。结果 融水小型猪F1群体平均观测等位基因数为9.4400，平均有效等位基因数为5.2966，平均香隆指数为1.8085，平均有效杂合度为0.7737。结论 STR扫描技术适用于融水小型猪群体遗传结构分析；初步掌握了融水小型猪遗传结构。

甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的体液免疫影响*

金 晓， 李晓红， 贾森泉，胡凝珠， 胡云章

2018, 35(02):  21. 

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目的 研究甘油-3-磷酸对甲肝疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法 选取49只雌性ICR小鼠，分7组，每组7只，这7组小鼠分别为阴性对照、单纯抗原组、铝佐剂组和4组甘油-3-磷酸组，分别在免疫之后的第4、8、12、16、20周用酶联免疫法(ELISA)测定小鼠血清中的特异性的anti-HAV IgG水平。结果 在小鼠免疫之后的第4、8、12、16、20周单纯抗原组、铝佐剂组和4组不同剂量甘油-3-磷酸组均能检测到特异性抗HAV抗体，并且趋势为先升高后降低，且在免疫后的第8周最高；第4周和第8周的甘油-3-磷酸实验组的结果均高于单纯抗原组，且差异均具有统计学意义(P<0.05)，并且第4周甘油-3-磷酸组抗体水平均超过铝佐剂组，并具有统计学意义(P<0.05)，其中甘油-3-磷酸2 mg为最佳剂量组，其抗体水平在免疫后的第4、8、12、16、20周均高于单纯抗原组，且在第8周抗体水平达到峰值，抗HAV IgG水平为lg(3.064±0.07851),铝佐剂的也是在第8周抗体水平达到峰值，抗HAV IgG水平为lg(3.150 ±0.1382)。结论 甘油-3-磷酸有免疫佐剂的作用，能够有效、迅速地增强HAV诱导的体液免疫应答，是一种潜在、安全有效的新型疫苗佐剂。

2017年10月北京市啮齿类实验动物的病理检测

张茜茜，孙欣，宋银娟，李淼煊，倪家敏，吴晓倩，杨东明，陈合花，廖轶，姚娇，吴伟，赖梦雨，董浩迪，王璐，赵德明，周向梅，杨利峰

2018, 35(02):  27. 

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目的 通过检测北京市啮齿类实验动物的病理变化，为北京市实验动物质量监控及改进提供依据。方法 对送检的400只啮齿类实验动物，其中包括180只小鼠、80只大鼠、120只豚鼠及20只金黄地鼠，采集心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠，制成石蜡切片后进行HE染色，对镜检肝细胞肿胀的样品又分别进行了PAS染色和冰冻切片油红O染色，并于显微镜下观察。结果 此次进行实验动物质量的抽检，检出病变主要为小鼠、大鼠、豚鼠均出现不同程度的肝脏细胞肿胀，并均有糖原沉积病变检出，脂肪变性在豚鼠检出；此外小鼠及金黄地鼠，尤其是部分金黄地鼠出现明显肝脏坏死及炎性细胞浸润；小鼠和豚鼠的心脏发生增生性炎；小鼠肾脏炎性细胞浸润。结论 本次抽检的啮齿类实验动物基本健康，部分啮齿类动物的饲养管理仍需加强，本监测结果可为科研实验的准确性提供可靠有效的依据。

Nf-κb在遗传性糖尿病长爪沙鼠多种组织中的表达状况

龚菁菁，李小红，王存龙，李银银，陈振文，杜小燕

2018, 35(02):  33. 

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目的 探讨糖尿病长爪沙鼠6种组织中Nf-κb基因mRNA和蛋白的表达水平，以期探索长爪沙鼠糖尿病模型中Nf-κb的作用和靶器官。方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常血糖沙鼠各6只，分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织，用Q-PCR和Western blotting检测Nf-κb在各组织中mRNA和蛋白表达水平。结果 与对照动物相比，在糖尿病长爪沙鼠的肌肉、肾脏和脑组织中，Nf-κb基因的mRNA水平表达有升高趋势，脂肪中则显著降低，肝脏和心脏中仅有降低趋势。检测蛋白水平发现除肝脏外，其他组织的结果均与mRNA水平一致。结论 糖尿病长爪沙鼠脂肪组织是Nf-κb作用的靶器官。

树鼩粪便中病毒三种浓缩方法的效果比较

陈玲霞，尹博文，苗雨润，宋庆凯，李晓飞，代解杰

2018, 35(02):  38. 

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目的 比较树鼩粪便中病毒的三种浓缩方法，评价各方法的浓缩效果，为病毒浓缩方法的最佳选择提供依据。方法 将指示病毒(树鼩呼肠孤病毒，tree shrew’s reovirus, TRV)加入经离心过滤处理后的野生树鼩粪便上清中，采用PEG(聚乙二醇，polyehhylene glycol)沉淀结合超声分离法、铁离子絮凝的化学方法和GBviroFast病毒浓缩试剂盒对树鼩粪便上清分别进行浓缩，经实时荧光定量PCR技术对指示病毒进行绝对定量，比较各方法的浓缩效果。结果 TRV病毒悬液的载量为1.34E+05；铁离子絮凝的化学方法浓缩的TRV载量为1.86E+04，浓缩效率为49.57%；GBviroFast病毒浓缩试剂盒浓缩的TRV载量为0.98E+04，浓缩效率为26.12%；PEG沉淀结合超声分离法浓缩的TRV载量为2.30E+03，浓缩效率为6.13%。结论 三种方法均能浓缩粪便上清中低浓度的肠道病毒，铁离子絮凝方法最佳，GBviroFast病毒浓缩试剂盒其次，PEG结合超声分离效果最差。

液相芯片技术检测马立克氏病病毒方法的建立

朱余军，丛峰，肖丽，饶丹，伍妙梨，练月晓， 黄碧洪， 郭鹏举， 张钰， 黄韧，陈梅丽

2018, 35(02):  42. 

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目的 建立检测马立克氏病病毒的双抗夹心液相芯片技术方法。方法 将捕获抗体偶联到19号微球，分别确定捕获抗体的偶联量、检测抗体和SA-PE抗体的工作浓度，用建立的液相芯片方法进行特异性、灵敏度、重复性及临床样品的分析。结果 1×106个荧光编码微球的抗体偶联量为2 μg，最佳的检测抗体与SA-PE的工作浓度分别为2 μg/mL和4 μg/mL。该方法特异性强，只检出马立克氏病病毒，其他病毒未检出；灵敏度为125 pfu/mL；批内批间的变异系数分别为0.85%和2.4%；对58份临床样品检出率为31%。与PCR方法比较，符合率为94.8%。结论 建立的马立克氏病病毒液相芯片检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好等优点。该方法可用于马立克氏病的监测，也可用于SPF鸡的筛选。

大鼠亚急性酒精性肝损伤模型的建立

柴玮杰，孙建飞，王明秋，高珉之，孟 琳

2018, 35(02):  47. 

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目的 本研究参照国内学者一些造模方法，结合人体食用方式和饮酒习惯，通过对比饮用不同酒精剂量、不同饮用时间得出建立酒精性肝损伤的最易条件。方法 选用SPF级雌性Wistar大鼠(初始体质量150～180 g)30只，随机分为模型组和对照组。模型组分别给予酒精含量为15%、30%的普通白酒，对照组给予蒸馏水，以15 mL/kg·BW经口灌胃方式给予，试验周期分为8周。实验结束时从大鼠眼眶静脉丛采血，测定血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基酸转移酶(AST)、乙醇脱氢酶(ADH)；取肝脏，测定肝脏组织MDA、SOD、GSH、TG及肝脏组织病理学损伤。结果 结果显示， MDA 30%酒精组与空白对照组比较有显著性差异(P0.05)。模型组大鼠血脂代谢紊乱、肝内脂肪蓄积，病理组织学检查可见弥漫性的肝细胞脂肪变性，细胞内可见大小不等的脂肪滴，从肝脏病变得分来看，15%酒精组、30%酒精组肝组织脂肪变性程度与空白对照组比较，有显著性差异(P<0.01， P<0.01)。结论 大鼠经口灌胃给予30%的普通白酒8周，可致肝损伤，结果可重复，成功建立了大鼠亚急性酒精性肝损伤的动物模型。

研究简报

自制气管插管在小尾寒羊全身麻醉中的应用

孙海明，韩婕，田枫，张阔，郑振辉

2018, 35(02):  52. 

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小尾寒羊脊柱变化趋势与人的有很多相似之处，随着外科模型的发展，成为研究脊柱发病原因与治疗方法的重要实验用动物模型。在羊脊柱外科实验中，对羊进行气管插管可以保证呼吸道畅通、辅助呼吸、便于监测调控、减少术中牵拉对气管的损伤。羊气管的长度较猪长，而且其嘴开口度有限，插管难度相对较大,而市售气管插管长度又不够。笔者经多次尝试后，自制了气管插管。应用自制的气管插管及工具，进行插管时，应熟悉羊的呼吸系统生理解剖结构，采用正确的气管插管方法。笔者对文献进行检索，发现相关文献较少，因之对小尾寒羊麻醉、对羊仰卧位麻醉后气管插管、术中监测及术后护理等方面进行了总结，为实验人员提供参考。

无特定病原体麻鸭种群的建立

韩凌霞，赵丽丽，于海波，张伟，张圆圆， 陈洪岩

2018, 35(02):  56. 

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目的 建立无特定病原体麻鸭种群。方法 以优质培育品种绍兴麻鸭白壳I号和金定鸭种卵为基础，通过疫病监测淘汰抗体抗原阳性个体、灭活疫苗免疫、整个生命周期应用鸭正压隔离器饲养、60Co射线辐照饲料、酸化饮用水、严格控制人流、物流等净化措施，同时开展了多种分子遗传学检测、生物学特性数据测定和疫病敏感性试验，以实现实验动物化。结果 成功建立了无特定病原、遗传学背景清晰、疫病敏感的HBK-SPF和SPF-JD鸭种群。结论 SPF麻鸭种群丰富了我国实验动物资源，为生命科学研究和生物制品研发提供了重要条件支撑。

实验动物设施环境检测移动平台的应用

张潇，刘巍，梁春南

2018, 35(02):  60. 

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目的 严格按照国家标准的要求进行实验动物设施环境检测，提高工作效率，节约人力成本。方法 设计一款便携式实验动物设施环境检测移动平台，用以进行环境检测。该平台可以通过调节高度、宽度和长度在实验动物设施内选取检测点。结果 该平台可以很好地在各种设施内应用，避免操作人员选点的系统误差。结论 该平台应用前景广泛，但便捷性还有待提高。

实验红鲫水族箱饲养技术

刘 娟，陈科洁，彭赞平，李登科，吴端生

2018, 35(02):  65. 

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目的 为完善实验红鲫标准化内容建立水族箱饲养技术。方法 总结多年来的实践经验，并参考文献。结果 选择大小约为1 200 mm×480 mm×755 mm(长×宽×高)的长方形水族箱，设置增氧泵、过滤器、照明灯等配套设施，模拟池塘生境进行布景。注入曝除氯气3 d后的自来水，保持水温在18～24 ℃，溶氧量在≥6 mg/L，酸碱度在pH7.5～8.5、光照在100～200lx、硬度(CaCO3)在95～105 mg/L、氨(NH3)浓度在≤0.02 mg/L等。按100 mm体长的80尾/m3水体的饲养密度，投放质量合格的实验红鲫。每日投喂全价颗粒饲料1～2次，每3～7 d部分换水1次，14～21 d全部换水并清洗水族箱1次，坚持做好日常管理与清洗消毒工作。结论 本文描述的饲养技术适合于用水族箱饲养实验红鲫。

Western blot在大鼠心肌缺血炎性因子研究中的应用

余帮兴，梁文斌， 王 文

2018, 35(02):  65. 

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目的 急性心肌梗死是一个严重威胁人类健康的高死亡率的疾病。炎症在急性心肌梗死损伤与修复中有着重要作用。本文探讨Western blot在大鼠心肌缺血炎性因子研究中的应用。方法 Western blot技术。结果 在大鼠心肌缺血炎性因子Western blot的有关研究中心肌组织裂解匀浆比例、定蛋白稀释比例、转膜条件的文献均较少，与其他组织的Western blot比较，有其特殊性。炎性因子(IL-6, IL-1β, TNF-α 和NF-κB)参与了心肌缺血的病理生理过程。结论 炎性因子参与了心肌缺血的病理生理过程。

研究进展

MXH10/Mo-lpr/lpr鼠在肿瘤诊断与治疗的实验研究

吕誉坤，彭 艳， 贾立敏，李明卿，郑金华

2018, 35(02):  74. 

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MXH10/Mo-lpr/lpr鼠表现为全身性的淋巴结肿大，6周龄时淋巴结直径可达1 cm。与其亲代MRL/lpr鼠相比，MXH10/Mo-lpr/lpr鼠有较轻的肾小球肾炎、血管炎、关节炎、唾液腺炎等症状且生命周期长。基于这些特点，MXH10/Mo-lpr/lpr鼠主要用于肿瘤淋巴结转移、淋巴管给化疗药的研究，并应用于小动物CT和MRI的诊断,为临床提供早期淋巴结转移诊断奠定可靠的临床前动物模型。本文将对MXH10/Mo-lpr/lpr鼠的遗传背景、特征性表型和应用加以概述，并介绍其在肿瘤诊断与治疗方面的应用。

条件性基因敲除动物及其在毒理学研究领域的应用进展

胡 红，李子南， 郑 珊， 敬海明，冯 颖，尤育洲，李国君， 宁钧宇

2018, 35(02):  79. 

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动物实验是毒理学研究中的重要手段和核心内容。传统的基因敲除动物在胚胎致死性基因研究方面具有一定局限性。条件性基因敲除动物在克服传统基因敲除动物缺陷的情况下，为更深、更广的毒理学研究提供了重要工具。本文将从条件性基因敲除技术的原理及条件性基因敲除动物在毒理学领域中的应用进展两方面来进行综述。