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2014年 第31卷 第04期    刊出日期：2014-08-29

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研究 论著

猫疱疹病毒Ⅰ型( FHV-1) 抗体 ELISA 检测方法的建立与初步应用

王 吉，卫 礼，付 瑞，李晓波，王淑菁，巩 薇，岳秉飞，贺争鸣

2014, 31(04):  1-5. 

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摘要: 目的 建立猫疱疹病毒Ⅰ型( FHV-1) 抗体 ELISA 检测方法，应用于临床样品中 FHV-1 抗体的检测。方法 培养猫肾传代细胞( CRFK) ，接种 FHV-1 病毒，制备 CRFK 正常抗原和 FHV-1 特异抗原，滴定山羊抗猫 IgG-HRP 和 抗原最佳工作浓度，并进行特异性、敏感性、稳定性及精密性实验。结果 正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工 作浓度分别为 0. 05 μg /mL、10 μg /mL 和 1∶ 5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为 8. 7% 和 5. 8% ，批间平均变异系数分别为 11. 9% 和 6. 6% ; 检测灵敏度为 1∶ 6 400; 与猫细小病毒( FPV) 、猫杯状病毒( FCV) 均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于 25% 。结论 建立的 ELISA 方法重复性、稳定性好，特异性、敏感性强，可用于猫 FHV-1 抗体的检测。

2014 年春季北京地区啮齿类实验动物健康状况的病理学调查和分析

吕 悦，付永瑶，王继宏，刘春法，袁 振，姚 皓，赵文杰，程广宇，李 超，董浩迪，杨利峰，赵德明，尹晓敏，周向梅

2014, 31(04):  6-10. 

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摘要: 目的 2014 年 5 月本实验室对北京市 14 家单位的啮齿类实验动物的健康状况进行病理学调查。方法 采 集啮齿类实验动物的心、肝、脾、肺、肾、大肠和小肠后经 10% 福尔马林固定，通过石蜡切片 H． E． 染色、冰冻切片油 红 O 染色、PAS 染色于显微镜下观察。结果 绝大多数实验用鼠为健康状态，仅部分非健康动物出现不同程度的 肝细胞肿胀( 32. 6% ) 、轻度肺脏病变( 24% ) 、肾脏蛋白样渗出物和管型( 13. 2% ) 。本次抽检结果与前两年抽检结 果相比较，肝脏脂肪染色阳性率( 6. 2% ) 低于 2013 年春秋季的 17. 1% 和 6. 25% ，以及 2012 年春秋季的 26. 7% 和 14. 8% ，有降低的趋势。值得引起注意的是，肾脏病变从 2010 年春季在小鼠( 2% ) 和 2011 年春季在大鼠( 20% ) 中 偶发，发展至今，已经在小鼠( 6% ) 、大鼠( 12% ) 和豚鼠( 20% ) 中普遍存在，从偶发病变发展成为常发病变，应加强 防范。结论 本次调查结果表明北京地区啮齿类实验动物基本为健康状态，少数动物出现组织病理学变化可能与 饲养环境、饲料营养成分以及运输、处死时的应激有关，宜提高饲养管理水平和避免应激来加以改善。

丹参对 AD 模型小鼠学习记忆及脑内和血清内乙酰胆碱酯酶含量的影响

仇淑君，王忠良，李广意，赵胜蓝，袁 婧，曾 杰

2014, 31(04):  11-13. 

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摘要: 目的 观察丹参对三氯化铝( AlCl3 ) 所致的阿尔兹海默病( AD) 模型小鼠学习记忆能力的影响及其脑组织和 血清中乙酰胆碱酯酶( AchE) 含量的变化。方法 AD 模型组: 给小鼠每日按 400 mg /kg 灌胃 4% 的 AlCl3 溶液，连 续灌胃 60 d。正常对照组: 每日灌胃与 AlCl3 等同剂量的生理盐水。丹参治疗组: 每日灌胃 AlCl3 + 丹参溶液 1 mL。 丹参对照组: 每日只灌胃丹参溶液 1 mL。实验周期为 60 d。给药结束后进行 Morris 水迷宫训练，24 h 后进行学习 记忆功能测试和乙酰胆碱酯酶含量的测定。结果 丹参治疗组、丹参对照组与正常对照组比较，小鼠的逃避潜伏 期以及其脑组织和血清中的乙酰胆碱酯酶含量无明显变化，差异无统计学意义( P ＞ 0. 05) 。与模型组小鼠比较，丹 参治疗组小鼠的逃避潜伏期明显缩短( P ＜ 0. 05) ，并且其脑组织和血清中的乙酰胆碱酯酶含量比模型组明显降低 ( P ＜ 0. 05) 。结论 丹参能有效降低 AlCl3 致 AD 模型小鼠脑内及血清中胆碱酯酶活性，明显改善 AD 模型小鼠的 学习记忆功能，这可能是丹参可防治阿尔兹海默病的机制之一。

黄柏煎剂的抗炎、抗菌作用研究

杨 磊，张延英，李 卉，万学中，吴建军

2014, 31(04):  14-17. 

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摘要: 目的 观察黄柏煎剂的抗炎、抗菌作用。方法 昆明种小鼠 50 只按体质量随机分为 5 组，小鼠连续灌胃黄 柏煎剂 7 天后小鼠左耳廓内外侧涂 20 μL 二甲苯致炎，右耳不涂作为对照，计算各组耳肿胀度及抑制率; SPF 级 SD 大鼠 40 只在左、右前肢分别埋入无菌塑料环致肉芽肿，然后按体质量随机分为 5 组并按照相应剂量连续灌胃黄柏 煎剂 7 d，计算各组肉芽肿质量; 昆明种小鼠 60 只，根据性别和体质量随机分为 6 组，分别按照相应剂量连续灌胃 黄柏煎剂 7 d。第 7 天给药 1 h 后各组小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌菌液，6 h 再给药 1 次。观察小鼠在 72 h 内的 死亡率。结果 与对照组比较，黄柏煎剂各剂量组均能不同程度的抑制小鼠耳廓肿胀度，差异具有统计学意义( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ，其中以低剂量组的作用最好; 与对照组比较，黄柏煎剂低剂量组能显著降低大鼠肉芽肿质量 ( P ＜ 0. 05) ; 高、中剂量组有一定的降低趋势，与对照组比较，差异无统计学意义( P ＞ 0. 05) ; 黄柏高、中、低剂量组 的死亡率分别是 50% 、40% 、20% 。与对照组比较，中、低剂量组可降低感染小鼠的死亡率( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) 。 结论 黄柏煎剂具有良好的抗炎、抗菌作用。

Rag2 敲除大鼠剖腹净化

范 涛，张 坤，郑振水，王劲松，左 琴，刘佐民，贺争鸣

2014, 31(04):  18-20. 

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摘要: 目的 利用剖腹产的方法对基因工程 Rag2 敲除大鼠进行净化。方法 分别对见栓第 20 天和第 22 天的孕鼠 进行剖腹产手术，剖得仔鼠于 6—8 日龄时进行剪尾作 PCR 基因型鉴定，6—8 周龄进行微生物检测和基因型鉴定。 结果 大鼠剖腹产于见栓第 22 天进行，可以显著提高成活率，平均离乳率 84. 48% ; 净化后经检测，微生物等级符 合 SPF 级标准; 经基因型鉴定，可获得纯合子大鼠。结论 Rag2 敲除大鼠通过剖腹产净化可获得 SPF 级纯合子后 代，证明该方法可行。

三种不同诱因制作急性肺损伤动物模型的比较

郑国安，张俊明，周艳艳，黎砚书，褚 芳

2014, 31(04):  21-23. 

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摘要: 目的 对由盐酸( HC1) 、油酸( OA) 和脂多糖( LPS) 3 种诱因所致急性肺损伤( ALI) 动物模型进行比较。方法 将 24 只健康雄性 SD 大鼠随机均分为 4 组: 生理盐水( NS) 组( 尾静脉注射) 、油酸组( 尾静脉注射) 、LPS 组( 尾 静脉注射) 和 HC1 组( 气管内滴入) 。制模后观察 4 h，抽取颈总动脉血进行血气分析。然后处死，解剖取肺组织 HE 染色，观察肺组织病理形态学改变，并进行病理损伤评分。结果 HC1 组、OA 组、LPS 组氧分压( PaO2 ) 均低于 NS 组( P ＜ 0． 01) ，其中 OA 组低于 HC1 组，HC1 组低于 LPS 组，( P ＜ 0． 01) ; 肺损伤程度油酸 ＞ 盐酸 ＞ 脂多糖。结 论 ALI 的发生发展与其致病因素密切相关; 3 种诱因所致急性肺损伤动物模型存在一定差异，急性肺损伤程度不 同，油酸 ＞ 盐酸 ＞ 脂多糖。

慢性疲劳综合症大鼠模型的建立

饶子亮,王 诺,郑佳琳,王 弋,姚嘉琪,邝少松,唐小江

2014, 31(04):  24-27. 

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摘要: 目的 采用拥挤和睡眠紊乱方法制作慢性疲劳综合症( CFS) 动物模型，观察拥挤程度、生活空间大小对造模 的影响。方法 大鼠拥挤在不同的小饲养箱内，并采用噪音和昼夜颠倒干扰大鼠的正常睡眠，造模持续 7 周。观 察大鼠精神状态、皮毛色泽并评分，每周测量体质量、摄食量，研究结束时进行力竭游泳实验。结果 造模后，大鼠 一般表现评分值明显升高，大鼠体质量、摄食量、力竭游泳时间降低。其中生活空间最小、拥挤程度最高组的大鼠 症状最典型: 精神萎靡不振，攻击性、对抗性行为消失; 皮肤松弛，皮下无脂肪; 全身毛发枯槁，稀疏脱落，造模 7 周 时一般表现评分值达到 5. 6 分，体质量、摄食量、力竭游泳时间降低最明显。结论 采用拥挤和睡眠紊乱方法成功 构建了 CFS 动物模型，并且拥挤程度越高、生活空间越小慢性疲劳综合症表现越明显。

乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠 2-细胞胚胎的冷冻保存

郭红刚，卢领群，周生来，戴方伟，李 巍，李长龙，陈振文，萨晓婴

2014, 31(04):  28-31. 

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摘要: 目的 评价用乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠 2-细胞胚胎冷冻保存的效果。方法 通过超排卵处理 后与雄鼠交配获得长爪沙鼠 2-细胞胚胎，胚胎在冷冻液 EFS20 中平衡 3 min，然后移入冷冻液 EFS40 中平衡 1 min， 之后将细胞冻存管直接浸入液氮中保存。采用二步法复苏胚胎，复苏后移入改良的胚胎培养液( mKSOM) 中体外 培养。结果 采用该方法冷冻的胚胎复苏后胚胎回收率为 86. 73% ，存活率为 82. 94% ，复苏后存活的胚胎中约 1 / 3 胚胎可以在体外发育到囊胚。结论 乙二醇玻璃化冷冻液适于冷冻保存长爪沙鼠 2-细胞胚胎。

腰痛贴膏对家兔腰椎间盘突出症模型的影响

杜佳林，包玉龙，李显石，范英兰，甘 雨，乔菊久，李 淼，李显华

2014, 31(04):  32-35. 

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摘要: 目的 观察腰痛贴膏对家兔腰椎间盘突出症模型的影响。方法 采用手术方法将圆形滤纸片放于家兔骶神 经根腋窝部，造成家兔腰椎间盘突出症模型，观察腰痛贴膏对家兔腰椎间盘突出症模型的影响。结果 腰痛贴膏 各给药组兔的全瘫恢复、痛觉恢复、触觉恢复均比模型组提前，恢复比例比模型组高，以腰痛贴膏高剂量组恢复最 好，从全瘫到半瘫，半瘫到恢复的阳性率均达 90% 以上; 腰痛贴膏中、高剂量组滤纸片重量明显减小，血液流变学全 血黏度明显降低、红细胞电泳时间明显缩短。结论 腰痛贴膏能减轻神经干水肿、充血、变性及异物肉芽肿的形 成，具有促进神经纤维恢复、神经干的传导和改善模型兔瘫痪下肢尽快恢复的作用; 同时具有改善微循环、增加血 流量和改善血液流变学的作用。

人类疾病动物模型资源数据库的构建

黄红坤，唐小江，严家荣，武 昕，钟志勇，饶子亮，邝少松，黄小红，钟海潮，王 刚

2014, 31(04):  36-40. 

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摘要: 人类疾病动物模型资源数据库的构建，是为了使人们能够快速、准确地对动物模型资源进行筛选、分类，方便 研究人员选择需要的动物模型，并能快捷联系提供动物模型的单位，节省了查询时间，提高了科学研究的效率。本 数据库分为自发性动物模型数据库、诱发性动物模型数据库和基因工程动物模型数据库 3 部分，各部分都包含动 物模型名称、编号、实验动物信息、模型制备信息、提供模型单位信息、支持文献信息等内容。通过对数据库功能和 查询系统的构建，除为用户提供了查询服务，获取有用信息之外，亦对人类疾病动物模型资源信息化的发展和资源 共享具有深远意义。

硝酸银与传统抗生素对常见细菌和真菌的杀菌能力比较

潘立博，胡日新，王靖宇，王福金

2014, 31(04):  41-45. 

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摘要: 目的 比较硝酸银与传统抗生素对常见细菌和真菌的杀菌能力。方法 实验采用平板稀释法，即用 3 种药 物分别制成含不同梯度浓度药物的培养基，然后在其上涂布相应的细菌、真菌，根据菌落生长被抑制的状态，判断 最小抑菌浓度。结果 硝酸银对细菌和真菌都有抑菌作用，且无显著差异( P ＞ 0. 05) ，最小抑菌浓度 3—7 μg /mL; 金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌对新霉素较敏感，最小抑菌浓度在 0. 1—1 μg /mL 之间; 庆大霉素对金黄色葡萄球 菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为 0. 1 μg /mL 和 1. 25 μg /mL; 庆大霉素对绿脓杆菌无抑菌作用，而新霉素对绿 脓杆菌的抑菌作用较差，其最小抑菌浓度为 16 μg /mL。结论 硝酸银对细菌和真菌的抑菌作用无选择性，而抗生 素却表现出了抑菌的高度选择性。随着银粒子及银离子在医疗上的作用被重新认识，我们认为，在临床上可以复 合使用硝酸银和抗生素以达到更好的杀菌和抑菌效果。

对凋亡细胞 TUNEL 染色操作中的体会

张翠香，刘建勋，董小霞，洪晓华，王杨慧，侯金才，付建华，张 伟

2014, 31(04):  46-48. 

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摘要: 凋亡细胞的 TUNEL 染色已在科学研究中广泛应用。由于 TUNEL 染色的步骤多，操作精细，影响 DNA 断裂的 因素多，实验结果往往不够准确致使实验失败。总结多年实践经验，拟从组织的取材方式、取材大小、固定剂选择、 组织离体后缺血时间、组织在固定剂内的固定时间以及实验操作中的诸多细节等方面进行介绍。

SPF 级大鼠和小鼠保种设施的建立与运行

刘 科，夏冠玲，谭巧燕，杨 林，王 刚，唐小江

2014, 31(04):  49-53. 

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摘要: 大鼠和小鼠保种繁育是其扩大生产和推广应用的先决条件。保种繁育控制直接影响动物的遗传性状和质 量，影响扩大生产群产量。我中心 2012 年建成大鼠和小鼠屏障配套隔离包保种设施，并保存有大鼠和小鼠 7 个品 系。设施运行至今，保种动物质量较高，均符合 SPF 级动物标准。本文通过介绍我中心 SPF 级大鼠和小鼠保种设 施的建立，设施运行、操作和设施评定及经验体会，以及保种动物品系、质量要求，为大鼠和小鼠的保种及繁育工作 提供参考。

CRISPR-Cas 系统在生物学研究中的应用

康 峰，卢胜明，张海峰

2014, 31(04):  54-58. 

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摘要: 成簇的规律间隔的短回文重复序列( clustered regularly interspaced short palindromic repeats，简称为 CRISPR) 系统是一种新的基因修饰技术，具有制作周期短、成本低和作用高效等优点。本文从结构、研究历史、分类和分布、作 用机制和其在生物学研究中的应用等方面介绍 CRISPR-Cas 系统。

啮齿类动物高尿酸血症模型的研究进展

陶 慧，闫 婕，林发全

2014, 31(04):  59-62. 

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摘要: 建立理想的高尿酸血症动物模型是探索其发病机制及寻找控制和治疗该病药物的基础。国内外学者在建立 高尿酸血症模型的研究中已取得一定的进展，在这些模型中，应用啮齿类动物造模最多，其方法主要是依据增加尿 酸来源、抑制尿酸排泄和抑制尿酸酶作用的原理，利用相关药物进行造模。本文将对高尿酸血症啮齿类动物模型 其动物选择，诱导药物及诱导方法做一综述。