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2018年 第35卷 第06期    刊出日期：2018-12-28

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研究报告

ND3、NF-κB在遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏、肾脏中的表达定位

李振宗， 赵 晖，曹 琦， 章秀林， 刘一寒， 杜小燕， 陈振文， 郭 萌

2018, 35(06):  1. 

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的 比较正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠肝脏和肾脏组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位3(NADH dehydrogenase 3，ND3)和核转录因子κb(nuclear factor κB，NF-κB)蛋白的表达定位差异。方法 选取正常血糖长爪沙鼠和自发遗传性糖尿病长爪沙鼠各6只，分别采集动物的肝脏和肾脏组织，利用免疫组织化学检测ND3、NF-κB在各组织中的定位和表达水平。结果 ND3、NF-κB表达于长爪沙鼠肝脏实质细胞胞质中，与对照动物相比，糖尿病长爪沙鼠肝脏中NF-κB表达显著升高；ND3还表达于长爪沙鼠肾脏肾小管上皮细胞胞质中，且与对照动物相比，糖尿病长爪沙鼠肾脏中ND3表达显著升高。结论 在糖尿病长爪沙鼠中，ND3显著高表达于肾脏肾小管上皮细胞，NF-κB显著高表达于肝实质细胞，提示肾脏中ND3和肝脏中NF-κB的异常升高可能参与长爪沙鼠糖尿病的发生和发展。

慢性尿路感染大鼠模型的动态变化研究

钟志勇，冯学轩，严家荣，刘盛来， 刘骥德， 郑玉连， 唐小江

2018, 35(06):  7. 

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目的 建立慢性尿路感染大鼠模型并研究相关指标的动态变化。方法 雌性SD大鼠经膀胱处注入大肠杆菌液，以诱导慢性尿路感染大鼠模型，并灌胃盐酸左氧氟沙星治疗。第0、7、14、21、28天动态检测动物体温、尿细菌数、血常规及BUN、Cr值的变化。第31天进行肾脏及膀胱感染菌计数及组织病理学检测。结果 模型对照组在第7、14天体温显著升高(P<0.05)；第7～28天尿细菌数、第30天肾脏及膀胱感染菌数明显增多(P<0.05)；第30天膀胱及肾脏病理检查可见炎性细胞浸润及黏膜下层血管扩张充血。盐酸左氧氟沙星组尿细菌数、肾脏及膀胱染菌数明显下降(P<0.05)，膀胱及肾脏炎症明显减轻。结论 此法适用于建立慢性尿路感染大鼠模型及进行药效学观察。

活血消异方对子宫内膜异位症大鼠盆腔粘连及转化生长因子-β1的影响

李田田， 孙伟伟， 赵瑞华

2018, 35(06):  15. 

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目的 观察活血消异方对子宫内膜异位症盆腔粘连模型大鼠盆腔粘连程度及腹膜转化生长因子-β1表达的影响。方法 采用自体移植法将子宫内膜种植于肠系膜上建立子宫内膜异位症盆腔粘连大鼠模型，空白组、假手术组、模型组、活血消异方组、达菲林组，分别连续给药28 d后，评价各组大鼠盆腔粘连程度，比较空白组和假手术组正常腹膜、内异症各组病灶处腹膜组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达水平的差异。结果 1.与假手术组比较，模型组、中药组、西药组盆腔粘连评分均显著升高，差异有统计学意义(P0.05)。2.与空白组、假手术组比较，模型组TGF-β1蛋白和mRNA表达水平明显升高，差异有统计学意义(P0.05)。结论 TGF-β1参与内异症盆腔粘连的发生和发展，活血消异方能改善内异症盆腔粘连状况，抑制粘连组织中TGF-β1蛋白和mRNA的表达，且疗效与达菲林相当。

自发性基因突变SCD1-/-小鼠主要脏器参数、血液生理生化指标的观察

朱祥宇， 陈 烨，王学文，田 枫，陈章健，周淑佩

2018, 35(06):  22. 

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目的 探讨SCD1基因缺失对小鼠脏器参数，血液生理生化指标的影响。方法 选取8周龄SCD1-/-小鼠及其杂合子SCD1+/-小鼠，称取体质量及主要脏器，观察其脏器系数。比较不同周龄SCD1-/-小鼠及其杂合子SCD1+/-小鼠的血液细胞学和生化指标，观察其变化特点。结果 8周龄SCD1-/-小鼠与杂合子小鼠比较肝脏系数显著升高(P<0.05)。6～8周龄SCD1-/-小鼠与杂合子小鼠的血液细胞学指标相比RBC、MPV、PCT显著降低(P<0.05)，MCV、MCH、RDW、PDW、PLT、LYM显著增高(P<0.05)；血清生化指标ALB、TC、TG极显著降低(P<0.01)，ALP、ALT、UA极显著增高(P<0.01)。16～18周龄SCD1-/-小鼠与杂合子小鼠的血液细胞学指标MCHC、PLT、PCT相比极显著降低(P<0.01)，RDW、HCT、MCV都极显著增高(P<0.01)；血清生化指标ALP、TC极显著降低(P<0.01)。结论 SCD1基因缺失对小鼠鼠脏器参数、血液生理生化指标都有一定的影响。

冷藏雄鼠尸体应用于小鼠运输及意外死亡后品系恢复的可行性

周建丽， 王 颖， 曾文滔， 梅 云

2018, 35(06):  28. 

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目的 基于小鼠尸体4 ℃冷藏不同时长后精子的体外受精(IVF)效率，探讨低温冷藏小鼠尸体应用于小鼠运输及意外死亡后品系恢复的可行性。方法 实验组为5月龄C57BL/6 J雄鼠，脱颈处死后4 ℃冷藏24、48、72 h和96 h，取附睾尾精子IVF，对照组为正常5月龄C57BL/6 J雄鼠IVF，统计各组IVF受精率。结果 冷藏24 h后附睾尾精子具备正常受精能力，受精率为73.0%、60.0%和77.0%；48 h 组内差异大，受精率为0%、55.4%和3.2%；72 h受精率极低，受精率为3.2%、0%和1.7%；96 h 精子有活力，但无受精能力。所有受精卵均可发育至2细胞，冷藏24 h组和对照组分别移植受体妊娠率分别为60%和66%，证明4 ℃冷藏对胚胎发育无影响。结论 C57BL/6J鼠经4 ℃冷藏的附睾尾，在24 h内具备稳定的受精率，可用于小鼠运输及特殊情况品系恢复。

用五种标准物质的稳定性评价实验动物遗传质量研究

王 洪，魏 杰，邢 进，巩 薇， 岳秉飞

2018, 35(06):  32. 

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目的 通过分析5种标准物质的稳定性，获得标准物质的贮存条件和运输条件。方法 依据国家标准 GB/T 14927.1—2008进行标准物质的制备，设定-20℃，4℃，室温和37℃为4个温度检验点，设定1、2、3、7、14、30、60 d和90 d为8个时间检验点，进行稳定性检验。结果 5种标准物质在4 ℃和-20 ℃均可以稳定保存至90 d。过氧化氢酶-2在37 ℃能稳定保存3 d，其他4种标准物质在37 ℃仅能稳定保存1 d。在室温条件下，苹果酸酶-1，异柠檬酸脱氢酶-1和过氧化氢酶-2能稳定保存3 d，碱性磷酸酶-1能稳定保存5 d，肽酶-3能稳定保存14 d。结论 用于实验动物遗传质量评价使用的标准物质，有必要严格控制其保存条件和运输条件。

制动致福利受损大鼠部分行为学改变及其体内NF-κB的变化

董 敏，梁 磊， 尤金炜， 马 畅， 张旭亮， 恽时锋

2018, 35(06):  36. 

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目的 观察制动致福利受损SD大鼠部分行为学改变以及体内NF-κB的变化。方法 选取体质量约200 g的雄性SD大鼠，使用管状容器给予束缚应激刺激，并通过旷场实验和O迷宫观测大鼠在第0、1、3、7、10、14天的行为学表现。测定了相应时期的NF-κB p65 mRNA转录水平和蛋白表达量。结果 束缚第3天起，大鼠肝脏组织NF-κB p65 mRNA转录水平和蛋白表达均较束缚前显著增高 (P< 0.05)，但此时尚未见行为学改变；束缚第7天起大鼠的活动兴趣与活动能力水平较束缚前显著下降 (P< 0.05)，显示焦虑、恐惧状态。结论 制动致福利受损大鼠肝细胞内NF-κB mRNA及蛋白表达的变化早于行为学的改变。

含黄油的高脂饲料诱导高脂血症小鼠模型特征的研究

李 静，杨俐萍，朱顺星， 邵晶晶， 刘玉山， 陈旭东

2018, 35(06):  41. 

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目的 建立富含牛奶制品黄油饮食诱导小鼠高脂模型，观察和分析其高脂血症的特征。方法 选择同窝雄性C57BL/6小鼠20 只，随机分成2组，每组各10 只。一组小鼠喂养普通饲粮(不含黄油)，设为对照组，另一组小鼠喂养添加黄油的高脂饲粮，设为高脂组。实验期为120 d，动态检测小鼠体质量、血脂及体脂的变化，观察肝脏组织病理学变化。结果 1)造模120 d，与对照组小鼠相比，高脂组小鼠体质量及血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)量明显增加(P<0.001)，而血清总甘油三酯(TG)量无明显差异；(2)与对照组小鼠相比，高脂组小鼠腹部脂肪及肝脏质量系数显著增加(P<0.001)；(3)高脂组小鼠肝脏出现严重的脂肪变性及炎性细胞浸润。结论 含有黄油饲料喂养形成的小鼠高脂模型出现血中总胆固醇明显改变，而总甘油三酯无明显变化的特征，提示牛奶制品黄油在饮食诱导的单纯高胆固醇血症动物模型中起着重要的作用。

胸膜穿刺针联合OB吻合胶构建615小鼠胃癌皮下移植瘤模型

程 诚，曾永蕾， 王 茎， 吴 勇， 冷玉玲，孙 春， 臧刘兵， 尹亚男， 刘 青

2018, 35(06):  47. 

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目的 采用胸膜穿刺针联合OB吻合胶构建615 小鼠皮下移植瘤模型。方法 小鼠前胃癌细胞株(MFC)在无菌环境下培养制成浓度1×107个/mL细胞悬液，然后将悬液接种于小鼠右腋下，建成胃癌动物皮下移植瘤模型，利用瘤块进行体内传代3次，胸膜穿刺针法进行穿刺移植建立615小鼠皮下移植瘤模型。同时建立对照组(未放瘤块)用于对比，小鼠成瘤情况利用外观形态学和HE染色方法评价。结果 模型组小鼠体质量减轻。模型组肿瘤在第12天后生长较快，模型成功率为100%。外观形态学观察，模型组10只小鼠成瘤率100%，平均瘤重为(7.7160±0.2937)g;对照组成瘤率为0，模型组与对照组差异明显(P<0.01)。病理结果显示：模型组的瘤块体积较大，表面不规则，细胞核呈圆形、卵形或异形，核仁不显现，核分裂相较明显，是比较典型的胃癌组织的形态特征。结论 胸膜穿刺针联合OB吻合胶法构建615小鼠胃癌皮下移植瘤模型成功率高、并且具有高效、便利等特点，值得推广应用及研究。

C57BL/6小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

练高建，杨神书， 何理平，尹倩梅， 谭翔文，吴端生， 苏泽红

2018, 35(06):  52. 

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目的 为更好地研究多发性硬化症(MS)的发病机理、开发具有良好效果的MS治疗药物，建立起能高度模拟人类多发性硬化症发生发展的小鼠模型则显得尤为必要且具有极高的应用价值。本文使用已广泛应用的标准化C57BL/6小鼠作为实验对象，成功地构建了实验性变态反应性脑脊髓炎模型(EAE)。此模型为研究人类多发性硬化症的发病机理及开发相关临床治疗药物提供了良好的小鼠模型。方法 C57BL/6雄性小鼠20只，分为2组。EAE组10只，皮下注射混匀的弗氏不完全佐剂与MOG53-58及结核分枝杆菌的悬浊液，同时分别在day0和day2腹腔注射百日咳毒素0.2μg/只;正常对照组10只，仅注射生理盐水。采用HE染色方法观察小鼠组织学变化;免疫组织化学方法进一步研究小鼠病理变化。结果 从抗原免疫后第10天开始EAE组小鼠陆续发生EAE临床症状且发病率达到100%，而正常对照组小鼠未发生任何EAE临床症状。组织病理学结果分析显示，EAE组小鼠脊髓及脑组织中出现大量炎性细胞浸润且脱髓鞘严重。结论 本实验成功构建的EAE小鼠模型病程稳定且发病率高，可用于MS机制研究及MS防治药物的筛选。

柯萨奇A组16型对不同细胞的敏感性研究

王永菲，于 伟， 朱晓伟

2018, 35(06):  57. 

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目的 细胞是进行病毒分离时常被选用的基质，为了分离肠道病毒CVA16型，我们选取了两种细胞，从中筛选出肠道病毒CVA16型的最敏感细胞。方法 将20份样本通过核酸检测确定其中的CVA16型阳性样本，通过对比RD、VERO这两种细胞的分离效果来比较细胞的敏感性。结果 核酸检测20份样本中确定9份样本为CVA16型，9份样本在RD细胞中分离出6株毒株，在VERO细胞中分离出8株毒株。结论 CVA16型对VERO细胞的敏感性高于RD细胞，实验中分离CVA16型应首选VERO细胞。

树鼩胸主动脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定

宋庆凯， 尹博文， 陈玲霞， 李晓飞 ，苗雨润， 代解杰 ，孙晓梅

2018, 35(06):  62. 

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目的 体外分离、培养树鼩(Tupaia belangeri)胸主动脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs)，并对培养细胞进行初步鉴定, 为新型实验动物树鼩的应用研究提供体外模型。方法 无菌取幼龄树鼩胸主动脉，采用组织块培养法和胰蛋白酶、胶原酶连续消化法分别进行树鼩胸主动脉血管内皮细胞分离，经完全培养液培养，倒置显微镜观察细胞形态，并用抗Ⅷ因子抗体进行荧光染色鉴定细胞。结果 经组织块培养法分离培养的血管内皮细胞，3 d有细胞贴壁，7 d后细胞从组织块中大量长出，15 d汇合为单层；酶消化法所得细胞12 h即贴壁，3～7 d生长较快，12 d汇合成单层，镜下观察发现细胞呈典型的铺路石状；两种方法分离所得原代细胞经体外培养传代，6代内，细胞生长均良好；利用血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子进行免疫荧光鉴定后确定为阳性。结论 本研究采用简便的方法成功分离到了树鼩胸主动脉血管内皮细胞，为血管内皮细胞相关研究提供了实验模型。

莫诺苷对脑缺血再灌注大鼠海马细胞周期蛋白表达的影响

刘婷婷， 许栋明，孙芳玲， 郑文荣， 祝自新， 田 欣，郭德玉， 王 文

2018, 35(06):  66. 

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目的 观察莫诺苷对脑缺血再灌注大鼠细胞周期相关蛋白表达的影响。方法 Sprague-Dawley大鼠用线栓法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)再灌注模型后，随机分为假手术组、模型组、莫诺苷小剂量组(30 mg/kg体质量)、莫诺苷中剂量组(90 mg/kg体质量)、莫诺苷大剂量组(270 mg/kg体质量)。造模7 d后，用Western blot 方法检测大鼠患侧海马细胞周期相关蛋白CyclinD1及CDK6的表达情况。结果 与假手术组相比，模型组CyclinD1蛋白表达显著增加；与模型组相比，莫诺苷中剂量组与大剂量组CyclinD1显著降低。与假手术组相比，模型组CDK6蛋白表达显著增加；与模型组相比，莫诺苷小、中、大三个剂量组CDK6蛋白表达显著降低。结论 莫诺苷能降低大鼠脑缺血再灌注后CyclinD1和CDK6的表达，从而抑制细胞周期相关蛋白的异常激活，发挥神经保护作用。

研究简报

如何提高病毒外源因子检测中小鼠和乳鼠检查法的成功率

冯学轩， 钟志勇， 严家荣 ，黎莉斯， 邝少松

2018, 35(06):  70. 

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随着生物制品在临床上的应用日益广泛，其安全性也备受关注。根据国家规定，拟上市的生物制品需依照2015版药典要求进行病毒外源因子检测以控制其质量，但其中较为关键的小鼠、乳鼠检查法在实际操作中存在一定的困难，导致检测结果易出现假阴性或假阳性，有鉴于此，本文以广东省医学实验动物中心丰富的检测经验为依据，对小鼠及乳鼠检查法的关键点进行归纳总结，拟提供高效实用的操作方法并提高该检查法的成功率。

研究进展

浅谈美国兽医教育和实验动物兽医培养系统

刘 波，李 靖

2018, 35(06):  73. 

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美国是目前世界上兽医教育最为发达的国家。兽医学是美国教育部认定的博士专业学位，专业学位是与研究学位不同的另一种成熟的学位教育。美国的兽医需要经过激烈的竞争进入兽医学院，完成昂贵且严苛的兽医教育，通过高难度的北美兽医执业资格考试，才能合法从业。美国目前已经形成了成熟的兽医博士后进阶程序，包括实习医师，专科住院医师的培养和认证体系。本文从兽医学院入选前的培训及经历,阐述了美国社会对待兽医教育的常态，并以实验动物专科为例，介绍了兽医学院毕业后美国兽医的专科发展路径。

研究简报

OA动物模型的相关促进因素及评价标准

苏川涛， 钟志安， 京芳华， 黄 璐， 易 凡

2018, 35(06):  77. 

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本综述主要对骨性关节炎动物模型的相关促进因素及评价标准进行分析，从而为寻求骨性关节炎治疗方案寻求更好的研究方案及实验方法。

研究进展

弱视动物模型的制作与评价

曹朝霞，刘安国， 李小娟，严兴科

2018, 35(06):  81. 

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弱视是儿科常见的一种眼科疾病，为儿童的生活带来了极大的困扰，建立理想的弱视动物模型对于该病症的实验研究尤为重要。目前弱视动物的造模方法主要有：眼睑缝合法、眼直肌切断法、黑暗环境饲养法、视网膜摘除法。本文综述并分析了不同动物种类弱视模型制作方法的优、缺点，为科研实践中选择使用弱视模型提供依据。