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2017年 第34卷 第05期    刊出日期：2017-10-31

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研究报告

Mylpf 基因在自发性糖尿病长爪沙鼠 6 种组织中的表达水平分析

王存龙, 龚菁菁, 李小红, 李银银, 霍学云, 路 静, 吕建祎

2017, 34(05):  1-5. 

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摘要: 目的 分析 Mylpf 基因在糖尿病长爪沙鼠 6 种组织中的表达水平，进而探究长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制。方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各 6 只，使用 Ｒeal-time PCＲ 和 Western blotting 技术分别检测动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织中 Mylpf 的 mＲNA 和蛋白表达水平。结果 Ｒeal-time PCＲ 的结果表明，在骨骼肌、心脏和脑组织中，Mylpf 在糖尿病组 mＲNA 表达水平高于对照组。在脂肪组织和肝脏组织中糖尿病组 mＲNA 表达水平低于对照组。在肾脏组织中两组 mＲNA 表达水平基本相同。Western blotting 结果显示，在骨骼肌中 Mylpf 在糖尿病组蛋白表达水平高于对照组，且有统计学差异，在心脏和脂肪组织中 Mylpf 在糖尿病组蛋白表达水平低于对照组，在肾脏组织中蛋白表达水平基本相同，在肝脏和脑组织中没有检测出。结论 Mylpf 与长爪沙鼠糖尿病的发生有一定相关性，该基因对长爪沙鼠糖尿病的影响可能主要发生在骨骼肌和心脏组织中。

牛疱疹病毒Ⅰ型 PCＲ 检测方法的建立及在牛源样本检测中的应用

王 吉, 付 瑞, 李晓波, 王淑菁, 卫 礼, 巩 薇, 岳秉飞, 贺争鸣

2017, 34(05):  6-12. 

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摘要: 目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型( BHV-1) PCＲ 检测方法，用于临床牛样本中 BHV-1 的检测。方法 根据已发表的 BHV-1 gB 基因保守区域设计合成引物，建立 BHV-1 PCＲ 方法，对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价，并用建立的 PCＲ 方法检测 64 份牛临床样本。结果 建立的 BHV-1 PCＲ 检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型 ( BPIV3) 、猪伪狂犬病毒( PＲV) 、单纯疱疹病毒Ⅰ型( HSV-1) 、犬疱疹病毒( CHV) 、均无交叉反应; 可检测病毒最小滴度为 5lg TCID50 /mL，对应的 DNA 模板浓度为 5. 26 × 102 拷贝/μL; BHV-1 DNA 在 － 30 ℃冰箱放置 12 个月仍可检测出目的条带。应用建立的方法检测 145 份牛源组织样本，BHV-1 核酸阳性率为 15. 2% 。结论 建立的 BHV-1 PCＲ 检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点，适合于临床牛样本 BHV-1 的感染的检测。

研究 论著

鼠脑心肌炎病毒 TaqMan 探针荧光定量ＲT-PCＲ 检测方法的建立

蔡骁垚, 张 泉, 陈懿斐, 林颖峥, 熊 炜, 魏晓锋, 陈鸿军

2017, 34(05):  13-17. 

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摘要: 目的 建立快速诊断鼠脑心肌炎病毒感染的荧光定量 ＲT-PCＲ 方法。方法 根据鼠脑心肌炎病毒( EMV) PEC9 毒株全基因组序列( GenBank 登录号: DQ288856. 1) ，设计一对特异性引物和 TaqMan 探针，建立 EMV 的 TaqMan 探针荧光定量 ＲT-PCＲ 方法，进行条件优化，检测其特异性，敏感性，稳定性。结果 建立的荧光定量 PCＲ方法，标准曲线的线性关系良好，r 2 值可达 0. 99，敏感性最低检测限为 1 个拷贝数，高于普通 PCＲ 方法 1000 倍，其特异性强，与其他常见感染的小鼠病毒株均无特异性扩增，批内和批间变异系数均小于 2% 。利用该方法对上海市 120 份小鼠心肌样品进行检测，未检测到阳性感染。结论 本研究为鼠脑心肌炎病毒感染的分子检测，为制定国家标准提供良好的方法。

莪术醇对 HNE1 鼻咽癌细胞荷瘤鼠的抑瘤作用

甘晓云, 寇 光, 张五萍, 伍锡栋

2017, 34(05):  18-22. 

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摘要: 目的 考察研究莪术醇对 HNE1 鼻咽癌细胞荷瘤鼠的抑瘤作用。方法 体外通过细胞划痕试验，考查莪术醇不同浓度( 12. 5 μg /mL、25 μg /mL、50 μg /mL、100 μg /mL) 对 HNE1 鼻咽癌细胞迁移能力的影响，计算细胞迁移率( 细胞迁移率( % ) = ( 0 h 划痕距离 － 12 h/ /24 h/48 h 划痕距离) / 0 h 划痕距离 × 100% ) ; 体内采用 HNE1 鼻咽癌细胞接种裸鼠待长出实体瘤，将实体瘤移植裸鼠皮下建立 HNE1 鼻咽癌荷瘤鼠模型，用莪术醇分别给实验组裸鼠灌胃 0. 79 mg /10 g，对照组给灭菌蒸馏水，阳性组给予去氧氟尿苷，每日 1 次，连续 30 d。每周测量体质量和肿瘤大小 2 次，第 30 天给药后处死小鼠，解剖称肿瘤质量，体积计算公式 V = a × b × c × π/6，计算抑瘤率，评价莪术醇对 HNE1 鼻咽癌荷瘤鼠的抑制作用。结果 与对照组比较，体外试验证明莪术醇 100 μg /mL 对 HNE1 鼻咽癌细胞迁移性有统计学意义( P ＜ 0. 05) ，体内试验证明莪术醇组对 HNE1 鼻咽癌细胞荷瘤鼠肿瘤的抑制作用明显，抑瘤率为 34. 04% ，肿瘤质量与对照组比较有统计学意义( P ＜ 0. 05) ，与对照组和去氧氟尿苷组比较，肝脏和脾脏系数均有统计学意义( P ＜ 0. 05) ，且与去氧氟尿苷组比较，肝脏系数有统计学意义( P ＜ 0. 05) 。结论 通过实验得出莪术醇能降低 HNE1 鼻咽癌细胞迁移能力并对荷瘤鼠肿瘤具有抑制作用，为莪术醇对肿瘤的抑制作用研究提供了实验基础。

研究报告

温郁金挥发油对 Aβ25 － 35 致阿尔兹海默病小鼠模型行为学的影响

齐 越, 刘 冉, 贾 冬, 姜 鸿, 康 凯, 王雅斌

2017, 34(05):  23-27. 

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摘要: 目的 研究温郁金挥发油对 β-淀粉样蛋白( Aβ25 － 35 ) 致阿尔茨海默病( AD) 模型小鼠的学习记忆改善作用。方法 60 只昆明种小鼠随机分为假手术组，模型组，温郁金挥发油低( 0. 016 mL/ kg) 、高( 0. 048 mL/ kg) 剂量组，盐酸多奈哌齐组( 1. 30 mg / kg) 及参枝苓组( 2. 6 mL/ kg) ，海马内注射( Aβ25 － 35 ) ，制作小鼠 AD 模型。连续灌胃给药 15 d。Y 迷宫和 Morris 水迷宫实验检测各组小鼠认知行为的改变，HE 染色观察其对 AD 模型小鼠神经元的影响。结果 温郁金挥发油可显著增加 AD 模型小鼠的自发交替反应率，缩短逃避潜伏期，减少总路程，延长游泳路程百分比，具有统计学意义( P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01) ; 可改善海马区神经元细胞排列紊乱、水肿等现象，减少神经元死亡。结论 温郁金挥发油对 Aβ25 － 35致阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力具有改善作用。

研究 论著

建立快速检测禽白血病病毒的液相芯片方法

肖 丽, 丛 峰, 朱余军, 练月晓, 关剑池, 黄碧洪

2017, 34(05):  28-30. 

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摘要: 目的 建立快速检测禽白血病病毒( Avian Leukosis Virus，ALV) 的液相芯片方法，为大量样品的检测提供技术支撑。方法 制备抗 ALV P27 单克隆抗体，生物素标记抗体，磁珠偶联捕获抗体，利用 Luminex200 分析系统验证该方法的特异性、敏感性及重复性。结果 阳性判定标准定为大于或等于空白对照的两倍。特异性检测结果显示与鸡的其他多种病原不存在交叉反应，特异性良好。同时多批次实验结果显示其变异系数在 7% 以内，说明该方法的稳定性好，可重复。结论 建立的检测 ALV 病原的液相芯片方法特异性好，稳定且可重复。

比格犬雌激素受体 EＲβ 以及剪切异构体 EＲβ419 、EＲβ431 的转录活性分析

沈欢欢, 游 颖, 范君文, 马雨楠, 曾 林, 胡仲明

2017, 34(05):  31-36. 

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摘要: 目的 分析比格犬雌激素受体 EＲβ 以及剪切异构体 EＲβ419、EＲβ431的转录活性。方法 将细胞分为 6 组，空白对照组( 正常含有培养液的 293T 细胞) ，LV5-EＲβ 组( 稳定表达 EＲβ 的 293T 细胞) ，LV5-NC 组( 感染慢病毒 LV5 空载体的 293T 细胞) ，Lenti-OE-Flag-EＲβ431组( 稳定表达 EＲβ431 的 293T 细胞) ，Lenti-OE-Flag-EＲβ419 组( 稳定表达 EＲβ419的 293T 细胞) ，Lenti-OE-Flag-EＲβ419-NC 组( 感染慢病毒 Lenti-OE-Flag 空载体的 293T 细胞) 。其中每组组内又分为 2 组，每组细胞瞬时转染构建的重组质粒 EＲE-LUC 和 ＲLUC，每组中的其中一组加入终浓度为 10μmol /L 的 E2，而另一组内加入等量无水乙醇。分别检测每组加入刺激( E2 和无水乙醇) 前后的荧光素酶活性。结果 成功地将雌激素反应元件 EＲE 克隆到荧光素酶报告载体 pGL3-Vector 启动子上; 设计引物扩增出的 hＲluc-neo 基因成功克隆到 pGL3-Basic 载体; 加入雌激素后，比格犬 EＲβ 转录活性明显升高( P ＜ 0. 01) ，而 EＲβ419和 EＲβ431转录活性在雌激素加入前后变化不大( P ＞ 0. 05) 。结论 成功建立了比格犬 EＲβ 的转录激活系统，而 EＲβ419 和 EＲβ431 的 LBD 区域都有部分的缺失，使得其不能与雌激素结合，继而转录活性无法被激活。

颅脑损伤大鼠动物模型制备及脑组织中 Bcl-2、Bax 变化的实验研究

郭新荣, 王瑞辉, 马小卫, 吴 涛, 郭 义

2017, 34(05):  37-40. 

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摘要: 目的 探索一种颅脑损伤大鼠模型制备方法并研究损伤动物脑皮层中 Bcl-2、Bax 含量变化。方法 将 SD 大鼠随机分为空白对照组、模型1 组、模型2 组、模型3 组和假手术组，使用电子颅脑损伤仪选定不同打击参数制备不同损伤程度的颅脑损伤模型，通过检测脑皮层中 Bcl-2、Bax 含量变化评测模型制备效果。结果 空白组和假手术组大鼠损伤脑组织大脑皮质神经元胞浆中 Bcl-2、Bax 均有弱阳性反应。模型各组损伤后脑组织损伤区大脑皮质脑神经元胞浆中 Bax、Bcl-2 呈强阳性反应，表达明显增多，且随损伤打击速度的增加而增多，各组之间具有统计学意义( P ＜ 0. 01) 。结论 利用颅脑损伤仪制备颅脑损伤模型大鼠能够通过打击速度、打击深度参数的精确设置而控制模型损伤程度，具有操作简单、打击强度准确、重复性良好的优点，能够根据研究需要制备理想损伤程度的动物模型。

实验动物金黄色葡萄球菌 LAMP 法快速检测

汪 淼, 杨 文, 刘学旭, 尹海林

2017, 34(05):  41-47. 

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摘要: 目的 建立一种灵敏、高效，可用于实验动物金黄色葡萄球菌检测的环介导等温扩增技术( Loop-mediated isothermal amplification，LAMP) 。方法 针对金黄色葡萄球菌 nuc 基因( V01281. 1) 参考设计 4 条 LAMP 扩增引物，并选取常见实验动物致病菌进行引物特异性检测; 通过优化 LAMP 反应体系中 Mg2 + 浓度、dNTPs 浓度及 LAMP 反应时间，确立 LAMP 反应最佳条件; 本文采用 LAMP 法和 PCＲ 法对不同浓度梯度的金黄色葡萄球菌以及用不同浓度金黄色葡萄球菌人工感染的粪样进行检测，比较两种方法的检测灵敏度。结果 通过条件优化，本实验建立的 LAMP 法检测实验动物金黄色葡萄球菌的最佳反应温度为 60 ℃，反应时间为 50 min，优化后的 LAMP 反应体系为 dNTP 浓度 2. 0 mmol /L、Mg2 + 浓度 8. 0 mmol /L、引物对 FIP/BIP 浓度 1. 6 μmol /L、引物对 F3 /B3 浓度 0. 2 μmol /L，且与其它常见实验动物致病菌无交叉反应; 对金葡菌纯培养物进行检测，LAMP 法检测灵敏度为 9CFU/反应管 ( 9 × 103 CFU/mL) ，PCＲ 法检测灵敏度为 9 × 101 CFU/反应管( 9 × 104 CFU/mL) ，对人工接种金黄色葡萄球菌的 SD 大鼠粪样进行检测，LAMP 法检测灵敏度为 4. 49 × 104 CFU/0. 1 g 粪样，PCＲ 法检测灵敏度为 4. 49 × 105 CFU/0. 1 g 粪样。结论 本实验建立的实验动物金黄色葡萄球菌 LAMP 检测方法，与 PCＲ 法，免疫学法和传统检测方法比较，具有特异性强、灵敏度高、操作简单等特点，可应用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测。

不同周龄 SHＲ、Wistar 大鼠血压及心电图背景数据的建立

林 琳, 凌亚豪, 范潇予, 阎晓丹, 张飘飘, 冯婧怡, 王爱平, 魏金锋, 靳洪涛

2017, 34(05):  48-52. 

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摘要: 目的 建立不同周龄 SHＲ、Wistar 大鼠血压及心电图背景数据参考值。方法 分别选用 12 只 SHＲ、Wistar 大鼠，从 6 周龄开始对其体质量、血压及心电图各指标进行了为期 17 周的连续监测。结果 SHＲ 大鼠 6 周龄开始，体质量增长缓于 Wistar; 血压指标包括心率、收缩压、舒张压、平均压均高于 Wistar 大鼠，并从 10 周龄开始血压趋于稳定; 心电图指标，SHＲ、Wistar 大鼠除部分间期如 QT 间期、ST 间期指标 6 到 9 周龄数据偏低，其余指标均较稳定，其中 ＲＲ 间期、QT 间期指标，SHＲ 大鼠有高于 Wistar 大鼠的趋势。结论 初步建立了 6 到 22 周龄的 SHＲ、Wistar 大鼠心血管系统的背景数据参考值，为其进一步应用提供了参考。

稀有鮈鲫饲料营养及饲养技术的实验研究

吴本丽, 罗 思, 熊小琴, 李慧慧, 王剑伟

2017, 34(05):  53-62. 

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摘要: 目的 探索稀有鮈鲫应用型配合饲料及相应的养殖技术，促进实验稀有鮈鲫的营养学标准化。方法 在营养学需求的研究基础上，探索并验证适合稀有鮈鲫日常养殖的应用型配合饲料。通过生长实验和繁殖实验，筛选得到适宜的饲料配方; 研究了温度、投喂频率、饲养密度等饲养策略对生长、性腺发育的影响。结果 25% ～ 40% 蛋白水平的配合饲料均可满足幼鱼快速生长需求，其中 30% 蛋白、6% 脂肪、总能为 12. 5 kJ /g 的投喂效果生长最好，同时，繁殖性能较高，可达到对照组的 69. 4% ; 亲鱼的产卵间隔随饲料蛋白水平的降低而延长; 在 18 ～ 24 ℃ 范围内，温度越高，生长越快，当温度超过 28℃ 时，体质量反而有所下降; 不同投喂频率下，最大生长均出现在 24 ℃ 时; 特定生长率随养殖密度升高呈明显下降的趋势，养殖密度为 0. 8 尾/L 时饲料利用率最高，1. 6 尾/缸组稍降低，但无显著差异。结论 30% 蛋白、6% 脂肪、总能为 12. 5 kJ /g 的配合饲料可满足稀有鮈鲫幼鱼的快速生长，且能使亲鱼能保持规律性繁殖，满足实验稀有鮈鲫传代和生产需要; 过高或过低的温度对生长不利，投喂频率的增加不一定能促进生长和饲料利用; 稀有鮈鲫幼鱼适宜的养殖温度为 24 ～ 26℃，每天投喂 2 次; 养殖密度对生长和性腺发育均有很大影响，适宜的养殖密度应不超过 1. 6 尾/L。

实验用羊微生物学质量控制标准的研究

张莹辉, 吴思捷, 王锡乐, 印春生, 康 凯, 李根平, 姚文生

2017, 34(05):  63-69. 

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摘要: 实验用羊是生物科学研究和医药生产检定中常用的实验用动物，目前尚无相应的微生物学质量控制标准。本文采取文献分析法和改良德尔菲专家咨询法，研究实验用羊微生物学质量控制的病原微生物种类以及检测规则，探索建立实验用羊微生物学等级及监测北京市地方标准，以期为北京市实验用羊的生产与使用单位在控制实验用羊的微生物学质量方面提供参考。

医学实验技术专业实验动物伦理学教学改革初探

孙 泉, 卢 静

2017, 34(05):  67-69. 

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摘要: 目的 为医学实验技术专业《动物伦理学》课程的教学提供借鉴。方法 从教学内容和教学方法等方面总结本学系近 12 年《动物伦理学》的教学实践。结果 设置合理的动物伦理学课程的教学内容，通过多种教学方法的实践，取得良好的教学效果。结论 这些教学经验对《动物伦理学》教学具有参考价值。

痛风模型动物的选择

王丽平, 朱以良, 陈 芳, 刘 琴, 张 宜

2017, 34(05):  70-72. 

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摘要: 痛风病动物模型是生物医学研究中所建立的可模拟人类痛风病特征的动物实验对象和材料。通过对痛风病动物模型的研究，有利于更全面深刻地认识人类痛风病的发生、发展规律和制定防治措施。笔者就其造模动物的选择及高尿酸血症动物模型、急性痛风关节炎动物模型两种痛风病动物模型的研究进展进行了系统的介绍和讨论，为认识痛风病的发病机制及防治提供借鉴。