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2015年 第32卷 第03期    刊出日期：2015-06-29

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研究 论著

B19 单倍型鸡 BNK 蛋白单克隆抗体的制备

吴少莲, 彭蔚宇, 王兴童, 文辉强, 廉传江, 陈洪岩, 韩凌霞

2015, 32(03):  1-5. 

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摘要: 目的 体外构建稳定表达鸡自然杀伤细胞( Natural killer，NK) BNK 蛋白的细胞系，制备 BNK 蛋白的单克隆抗体，为鸡 BNK 蛋白及 NK 细胞的研究提供便利。方法 利用 BNK19 原核表达产物免疫 BALB/c 小鼠，体外稳定表达疫病敏感性 B19 单倍型鸡 BNK 蛋白( BNK19) 的真核细胞系筛选单克隆抗体。结果 用稳定表达 BNK 蛋白的真核细胞系筛选到 2 株 BNK19 特异性单克隆抗体。结论 获得的单克隆抗体经鉴定具有免疫学活性，为鸡 BNK 蛋白及 NK 细胞的作用机制研究提供了条件。

HBK - SPF 鸭 MHC I 区域微卫星标记分析

韩凌霞,武永淑, 吴少莲, 彭蔚宇,王兴童, 韩建林, 陈洪岩

2015, 32(03):  6-9. 

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摘要: 禽主要组织相容性复合体是一组紧密连锁高度多态的基因群，与免疫反应或敏感性密切相关，鸭 MHC I 区域全长 36. 8 kb，由 TAP1、TAP2 和 5 个 MHC I 拷贝基因( UAA-UEA) 组成。HBK-SPF 鸭是中国农业科学院哈尔滨兽医研究所培育的无特定病原体种鸭，分为 B 和 Q 2 个品系，已封闭繁育了 7 个世代。本文在鸭 MHC I 区域筛选了 4个微卫星位点，通过单链构象多态性分析和聚合酶链式反应直接测序，发现 A 位点具有多态性，为( GT) n 的重复结构，第 6 代 HBK-B 和 HBK-Q 的31 个个体和第 7 代 的140 个个体进行聚合酶链式反应，结果直接测序，在重复结构之前的 108bp 中，发现了 4 种纯合单倍型和 6 种杂合单倍型; B 位点未得到目的产物; C 位点位于 MHC I 拷贝基因UDA 和 UEA 之间，扩增结果与 UAA 和 UBA 之间序列高度同源，无法判断基因型; D 位点表现为单态，为( ATA) 15的固定重复结构。本研究为进一步研究鸭 MHC I 基因结构和建立家系提供了依据。

Gln 对鸭瘟感染鸭十二指肠免疫调节相关基因表达量的影响

张圆圆,赵丽丽, 王 蕾, 牛银杰, 韩凌霞, 刘胜旺, 陈洪岩

2015, 32(03):  10-12. 

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摘要: 目的 为谷氨酰胺( Glutamine，Gln) 在正常鸭及鸭瘟( Duck plague，DP) 模型中对肠道功能及作用途径的研究提供依据。方法 280 只无特定病原体( Specific pathogen free，SPF) 7 日龄雏鸭随机分为 8 组，四组梯度剂量每天灌喂 Gln( 0、0. 5、1、2 g / kg 饲 料) 6d，及另四组灌喂同等梯度剂量 Gln 6 d，于 第 一 天 灌 喂 30 min 后 攻 0. 2 mL2000TCID50 鸭瘟病毒，观察 Gln 对正常雏鸭的免疫促进作用及攻毒鸭免疫应激的缓解作用。测定 Toll 样受体 4( Toll-like receptor 4，TLＲ4) 通路基因表达量。结果 Gln 显著提高正常组 TLＲ4 通路 mＲNA 表达量( P ＜ 0. 05) ，显著降低攻毒组表达量( P ＜ 0. 05) 。结论 Gln 通过 TLＲ4 通路提高正常雏鸭肠道的免疫力，降低鸭瘟病毒( Duck plague virus，DPV) 造成的肠道免疫损伤。

1 型鸭肝炎病毒强毒株在雏鸭体内分布情况研究

赵丽丽, 刘海燕, 牛银杰, 祝明皓, 刘胜旺, 陈洪岩

2015, 32(03):  13-15. 

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摘要: 目的 利用建立的 Taq 荧光定量 ＲT-PCＲ 检测方法研究鸭肝炎病毒( DHV-1) 强毒株在感染雏鸭体内早期的动态分布规律。方法 本研究采用鸭肝炎病毒强毒株人工感染 3 日龄雏鸭，利用已建立的 Taq 荧光定量 ＲT-PCＲ方法，对接种 24 h 内 DHV-1 强毒株感染雏鸭的组织脏器进行了定量检测。结果 接种后 4 h 即可在雏鸭心、肝、脑、肺、胰腺、回肠、盲肠、直肠、法氏囊和脾脏组织中检测到一定水平的病毒 ＲNA，随着病程发展，ＲNA 拷贝数持续升高，接种 24 h 后，肝脏中的病毒 ＲNA 拷贝数为最高，达到 108. 81 copies/g，心、肺、肾、脾次之，约 107copies /g。结论DHV-1 强毒在雏鸭的早期感染雏鸭的实质器官、免疫器官和消化系统等均具有广泛的嗜性。

DNA 稳定的银纳米簇用于检测端粒酶活性研究

祝明皓,陆涛峰, 陈洪岩

2015, 32(03):  16-18. 

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摘要: 目的 建立利用 DNA 稳定的银纳米簇检测端粒酶活性的方法。方法 利用合成的寡核苷酸序列能稳定银纳米的特点，在强还原剂硼氢化钠存在下还原银离子得到具有良好荧光特性的银纳米簇。结果 利用端粒酶活性能够延伸 5' － ( TTAGGG) n － 3'的特性，以及含有 G 碱基的 DNA 序列靠近银纳米簇合成模板时，合成的银纳米簇的荧光明显提升特性建立端粒酶活性检测的方法。结论 合成了以寡核苷酸为模板的银纳米簇并对其荧光特性进行表征，建立了 DNA 稳定的银纳米簇用于检测端粒酶活性的方法。

子宫直肠陷凹子宫内膜异位症对 Wistar 大鼠生殖能力影响的研究

张 薇, 黎福荣, 唐 彬, 赵 勇, 林以理, 曾维树

2015, 32(03):  19-22. 

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摘要: 目的 构建 Wistar 大鼠子宫直肠陷凹内膜异位症模型，对其病灶病理学形态及受孕率进行统计。方法 采用异体移植方法在 40 只 Wistar 大鼠的子宫直肠凹陷处移植子宫组织，建立子宫直肠陷凹子宫内膜异位症动物模型，10 只行假手术，8 周后投放雄鼠，观察雌鼠的产仔率，于第 15 周取材剥取模型大鼠在位与异位子宫内膜组织，进行组织学观察。结果 组织学上异位内膜的细胞形态呈增殖早期到分泌中期改变，和在位内膜呈增殖早期到分泌晚期改变发育不同步; 模型组大鼠平均产仔数为 6. 02 只，显著较假手术组 8 只及对照组为 8. 5 只低( P ＜ 0. 01) 。结论 Wistar 大鼠子宫内膜异位症内膜与在位内膜发育不同步，造成大鼠腹腔内环境异常，使受精卵着床变得更加困难，从而降低了大鼠的生殖能力。

黑蒜对链脲佐菌素糖尿病大鼠的降血糖研究

刘宇峰, 郭春景, 杨庆丽, 韩秋菊

2015, 32(03):  23-26. 

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摘要: 目的 研究“黑蒜”( Black garlic) 对链脲佐菌素致实验性糖尿病大鼠体质量与血糖的影响，并初步探讨其作用机理。方法 腹腔注射 50 mg / kg 链脲佐菌素造大鼠糖尿病模型。模型大鼠连续灌胃黑蒜 30 d，测定灌胃前及30 d 灌胃结束后大鼠体质量与血糖值。结果 剂量为 10 g / kg 的黑蒜对正常大鼠体质量和血糖水平没有显著的影响; 对实验性糖尿病大鼠高、中( 10 g / kg、5 g / kg) 剂量组与模型对照组大鼠比较体质量均持续下降，血糖值持续升高，其差异无统计学意义。低剂量组( 2. 5 g / kg) 与模型对照组大鼠比较体质量下降有所缓解，血糖值升高慢于模型对照组，其差异具有统计学意义。结论 适量食用黑蒜有降低血糖值、延缓糖尿病发展的作用，其机制尚需进一步研究。

Aβ1－40脑内注射对大鼠海马Na +-K + -ATP 和Ca2 +- ATP 酶活性的影响及加减地黄饮子的干预作用

牛英才, 谢宁

2015, 32(03):  27-29. 

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摘要: 目的观察加减地黄饮子对Aβ1 － 40脑内注射对大鼠脑组织Na +-K +-ATP 酶的影响。方法以大鼠海马注射β淀粉样蛋白导致的老年性痴呆模型，并以正常老龄鼠为空白对照，西药脑复康为阳性对照，对加减地黄饮子预防组和加减地黄饮子治疗组从Na + -K + -ATP 和Ca2 + -ATP 酶活性的影响进行了研究。结果加减地黄饮子具有提高三磷酸腺苷酶活性的作用。结论提高三磷酸腺苷酶活性的可能是加减地黄饮子防治老年性痴呆的机制之一，为补肾活血化痰开窍治疗老年性痴呆的观点提供了部分实验依据。

等离子体对裸鼠荷人源黑色素瘤的抑制作用观察

蒋立群, 李志满, 吴建军

2015, 32(03):  30-32. 

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摘要: 目的 测试等离子体( APNP) 对恶性黑色素瘤的抑制效果。方法 建立 B16 恶性黑色素瘤的裸鼠移植模型12 只，随机分为等离子体治疗组和空白对照组。定期测量肿瘤的长径和短径并观察动物的健康状态，计算肿瘤体积和抑瘤率。结果 治疗组的肿瘤抑制率为 88% 。结论 适量的等离子体具有有效抑制恶性黑色素瘤的生长能力。

猕猴不同组织器官中黄嘌呤脱氢酶 /氧化酶基因的mＲNA 表达的半定量 ＲT - PCＲ 检测方法的建立

李哲丽, 叶尤松, 彭 波, 李桂珍, 李润萍, 杨光蕊, 唐东红

2015, 32(03):  33-37. 

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摘要: 目的 建立半定量 ＲT-PCＲ 检测方法检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织，肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶( XDH /XO) 的 mＲNA 的表达。方法 分别提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织，肾脏组织中总 ＲNA，用 ＲT-PCＲ 二步法进行 XDH /XO 基因片段扩增，内参基因选用管家基因 GAPDH，对获得的目的片段进行序列测定以鉴定其特异性，在凝胶影像分析仪 Quantity one 软件得出其电泳条带的灰度值( IOD) ，计算目的基因与内参基因比值得到猕猴不同组织 XDH/XO 的 mＲNA 的相对表达量。结果 建立了半定量 ＲT-PCＲ 检测方法，猕猴不同组织 XDH /XO 的 mＲNA 表达在肝脏组织中表达水平最高，其次为心肌，肾脏，睾丸，皮肤。结论 本研究所建立的半定量 ＲT-PCＲ 检测方法可应用于检测猕猴各组织器官组中的 XDH /XO 的mＲNA 的表达差异。

拉布拉多犬神经类型相关基因SNP的分析

赵明媛, 俞剑熊, 韩芳, 李雅婵,张雅丽, 周子娟, 王福金, 王爱国, 王靖宇

2015, 32(03):  38-43. 

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摘要: 目的检测拉布拉多犬基因组DNA 中与神经类型密切相关的4 个基因中的6 个SNP 位点，以期为拉布拉多犬神经类型的早期鉴定提供分子遗传学鉴定指标。方法依据中国导盲犬大连培训基地成熟的导盲犬神经类型行为学评估标准，选取典型的安静、活泼、胆小型( 弱型) 三种神经类型的犬各4 只为研究对象，采取静脉血，提取血细胞的基因组DNA 样本，采用PCＲ/测序方法和PCＲ-ＲFLP 分析法对12 个样本4 个基因的6 个SNP 位点: COMT( G482A) 、MOAB( T199C) 、ABCB1( A985T、T3442C、377 － 378 insC) 、GNB1L( 961 － 962 insG) 进行变异型检测，并统 计分析SNP 位点的变异型与神经类型的关联度。结果COMT 基因G482A SNP 位点的G/A 型在胆小型犬中所占比例显著高于其在活泼型和安静型中所占比例( P = 0. 014; P = 0. 014) ，A/A 型在活泼型犬中所占比例显著高于安静型和胆小型中所占比例( P = 0. 025; P = 0. 025) ; MAOB 基因T199C SNP 位点的T/C 型在安静型犬中所占比例显著高于其在活泼和胆小型犬中所占比例( P = 0. 025; P = 0. 025) ; ABCB1 基因A985T SNP 位点的T/A 型在活泼型犬中所占比例显著低于其在安静和胆小犬中所占比例( P = 0. 014; P = 0. 014) ; ABCB1 基因T3442C SNP 位点的T/C型在胆小型犬中所占比例显著高于其在活泼和安静型犬中所占比例( P = 0. 025; P = 0. 025) ; ABCB1 基因的377 －378 insC 和GNB1L 基因的961 － 962 insG 均没有发现显著性差异( P ＞ 0. 05) 。结论COMT 基因G482A SNP 位点的G/A 型和A/A 型，MAOB 基因T199C SNP 位点的T/C 型，ABCB1 基因A985T SNP 位点的T/A 和ABCB1 基因T3442C SNP 位点的T/C 型与拉布拉多犬神经类型具有显著相关性，可做为拉布拉多犬神经类型早期鉴定的分子遗传诊断指标，但尚需大样本确认。

MＲL /lpr 狼疮小鼠和C57 小鼠血常规、主要脏器系数的测定与比较

杨林, 朱叶萌, 刘科, 代路路, 张辰子, 邝少松

2015, 32(03):  44-47. 

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摘要: 目的测定C57 小鼠与MＲL/lpr 转基因小鼠在4 月龄、5 月龄和6 月龄的血常规值和脏器系数。方法用MEK － 7222K 全自动血液分析仪检测C57 小鼠与MＲL/lpr 转基因小鼠血常规值。结果血常规检测方面，C57 小鼠与MＲL/lpr 转基因小鼠相比，中性粒细胞百分率( NE%) 、红细胞计数( ＲBC) 、红细胞压积( HCT) 、红细胞平均血红蛋白( MCH) 、红细胞平均血红蛋白浓度( MCHC) 在不同月龄的数值差异极显著( P ＜ 0. 01) ; 其中9 个检测比较项目差异不显著( P ＞ 0. 05) 。脏器系数方面，C57 小鼠的心脏系数、肾脏系数显著高于同月龄的MＲL/lpr 转基因小鼠( P ＜ 0. 01) ; MＲL/lpr 转基因小鼠的肝脏系数显著高于同月龄的C57 小鼠( P ＜ 0. 01) ; 其他比较项目差异不显著( P ＞ 0. 05) 。结论C57 小鼠与MＲL/lpr 转基因小鼠在同月龄的部分血常规数据和脏器系数差异显著。

常规饲料添加蛋黄和花生米的方法建立大鼠肥胖模型

李鸿雁, 颜克松, 战大伟

2015, 32(03):  48-50. 

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摘要: 目的通过常规饲料添加蛋黄和花生米的方法诱发建立雄性SD 营养性肥胖大鼠动物模型。方法30 只4周龄SD 雄性大鼠随机分为实验组24 只，对照组6 只。实验组饲喂正常饲料并添加鸡蛋黄及花生米，饲喂2 周后实验组剔除肥胖抵抗大鼠，对照组饲喂正常饲料。大鼠饲喂8 周后称量大鼠体质量并计算Lee's 指数，禁食12 h后处死，腹主动脉取血分离血清，检测血清中总胆固醇( TC) 、甘油三脂( TG) 含量，同时取肝脏组织进行组织病理学检查。结果实验组大鼠饲喂8 周后，体质量达到526. 6 ± 46. 4 g，对照组大鼠体质量为415. 6 ± 33. 7 g，实验组大鼠体质量超过对照组体质量26. 7%; 实验组的Lee' s 指数为330. 0 ± 8. 2，对照组Lee' s 指数为307. 0 ± 6. 6 ( P ＜0. 01) ，实验组与对照组比较有极显著差异。实验组的大鼠的血清TG 均值为2. 16 ± 0. 17 mmol /L、TC 均值为1. 40± 0. 34 mmol /L，对照组血清TG 均值为1. 66 ± 0. 11 mmol /L，TC 均值为0. 82 ± 0. 13 mmol /L，两组大鼠比较有极显著性差异。病理学结果显示: 实验组大鼠肝脏均出现脂肪样变。结论4 周龄SD 雄性大鼠采用正常饲料并添加鸡蛋黄及花生米的方法能稳定成功地建立营养性肥胖大鼠模型。

“技术员项目负责制”在高等医学院校动物实验设施运行管理中的重要作用

张洁,张爽,李胜利,乔欣,王钜,卢静

2015, 32(03):  51-53. 

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摘要: 高等医学院校动物实验设施的运行具有研究项目数量多、类型多、实验人员复杂等特点，给设施的管理带来了严峻挑战。为提高设施的管理效率，有效解决设施运行管理中的问题，我们提出了“技术员项目负责制”的管理模式。本文将介绍“技术员项目负责制”在高等医学院校动物实验设施运行管理中的重要作用，以期为其他动物实验设施的运行管理提供参考和支持。

GLP 试验用Beagle 犬的饲养管理

李松滨, 李宝龙

2015, 32(03):  54-55. 

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摘要: 建立GLP 机构试验用Beagle 犬的标准饲养规程，加强对饲养人员及试验人员的管理，保证实验犬的饲养管理科学规范。

骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化的研究进展

李振宇,陈玲霞,尹博文,代解杰

2015, 32(03):  56-61. 

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摘要: 由各种因素导致的重症肝病的终末治疗的最好手段一直是原位肝移植，但长期以来肝供体的缺乏和免疫排斥引起的一系列问题极大地限制了该手术的运用，同时，在肝脏相关药物的筛选中，原代肝细胞难于培养且易在培养过程中变异，而随着骨髓间充质干细胞研究的深入，越来越多的证据表明骨髓间充质干细胞具有向肝细胞分化的潜能。因此，骨髓间充质干细胞诱导分化而成的肝样细胞在再生医疗和药物筛选领域具有较好的运用前景，本文就间充质干细胞的分离培养及其生物学特性，肝样细胞的诱导培养条件，生物学特性及其运用前景加以综述。

精神障碍实验动物模型研究进展

金铭,蔡珍珍,张晓杰

2015, 32(03):  62-64. 

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摘要: 实验动物模型的发展制约着医学科学技术研究的进步，为了建立可靠的各类疾病动物模型，在世界范围内均有深入研究。疾病动物模型对医学事业的发展做出了巨大的贡献，但是，目前仍有许多人类疾病难以通过人工诱导的方法复制动物模型，而且许多疾病在实验动物体上不表现或仅仅只表现在高等哺乳类动物体上，因此，一个实验设计是否成功，实验是否能够顺利达到研究者的预期目标，实验动物模型的制备及动物选择就显得非常的重要。