实验动物科学

李学凤, 陈军,庄云芳, 董建一, 李慧玲, 王福金, 王爱国, 王靖宇

2015, 32(06): 1-7.

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摘要: 目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法，为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9 月龄H-ras12V 转基因肝癌小鼠为实验材料，采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法，并对其进行改进，即在灌注的同时，用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织，疏通灌注液流，达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数，并进行后续的原代细胞培养，观察第3、5、7 天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良，分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明，分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞，并显著提高其存活率和细胞质量，可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外，本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。

环磷酰胺对SD 大鼠生育力与早期胚胎发育毒性阳性模型的建立

孙昌华, 卜文, 祝清芬

2015, 32(06): 8-12.

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摘要: 目的探讨生育力与早期胚胎发育毒性试验中，皮下给予不同剂量的环磷酰胺对SD 大鼠的影响，选择合适的剂量建立阳性模型，积累实验室背景数据。方法取7 ～ 8 周龄健康SD 大鼠176 只，雌雄各半。按体质量随机分为溶媒对照组( Veh) 、环磷酰胺低( L: 10 mg·kg － 1 ) 、中( M: 20 mg·kg － 1 ) 、高( H: 40 mg·kg － 1 ) 剂量组，每组44 只，雌性各半。雄鼠于交配前28 d 开始给药，每周一次，给药期持续整个交配期直至处死; 雌鼠于交配前14 d 开始给药，交配前每周1 次，交配成功后第0 天给药1 次，总共给药3 次。雄鼠及未交配成功雌鼠于交配结束后处死剖检，雌鼠于受孕后第15 d 剖检，统计各剂量组雄鼠生育率; 雌鼠性周期、妊娠率; 孕鼠死亡率和死胎率。结果环磷酰胺低、中、高各剂量组对SD 大鼠生育力与早期胚胎发育均有一定的毒性作用，且随给药剂量增加，毒性作用增强。结论皮下给予SD 大鼠不同剂量的环磷酰胺，高剂量组对大鼠生育力与早期胚胎发育的毒性影响较为明显，故选择此剂量作为本实验室的阳性模型。

多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用

邢进, 冯育芳, 岳秉飞, 贺争鸣

2015, 32(06): 13-17.

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摘要: 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法，建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法，用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果BPW 预增菌、MKTTn 选择性增菌转种XLT4 培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基，在1015 份动物样品中检测出3 份沙门氏菌阳性，能够检测出垫料中1CFU/g 的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法，结果准确，可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。

P407 诱导和脂肪乳剂建立小鼠高血脂模型的比较研究

田华, 史红, 毕亚楠, 袁晓美, 周昆

2015, 32(06): 18-21.

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摘要: 目的比较P407( 泊洛沙姆) 和脂肪乳剂的小鼠高血脂模型的特点。方法采用灌胃法给予小鼠脂肪乳剂，腹腔注射法给予小鼠P407，之后测血清中的胆固醇( TC) 、甘油三酯( TG) 、高密度脂蛋白( HDL-C) 和低密度脂蛋白( LDL-C) 。结果脂肪乳剂造模后小鼠TC、LDL-C 显著升高，TG 显著降低，HDL-C 的变化没有显著性。P407-1d 组的小鼠TC、TG、LDL-C 显著升高，HDL-C 显著下降，符合临床典型高血脂的特征。结论用P407 建立小鼠高血脂模型更快速，更接近临床高血脂症。

丹参酮ⅡA 磺酸钠注射的肌肉刺激性研究

刘莹, 邢桂兰, 杨照新, 姚茂忠, 付健

2015, 32(06): 22-25.

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摘要: 目的考察家兔单次股四头肌肌内注射丹参酮ⅡA 磺酸钠( 60 mg) 后，给药局部肌肉组织是否出现扩张、红肿、充血、水肿、瘀斑、变性、坏死等局部肌肉刺激性反应，综合判断供试品肌内注射的安全性，并且为该药物的安全性评价提供参考。方法以等量等渗的氯化钠溶液为阴性对照药进行自身性对照，设结束期和恢复期两组，进行一般症状肉眼观察和组织病理学检查。结果家兔单次股四头肌肌内给药后一般症状观察均无异常表现; 剖检肉眼观察结果评分符合标准; 剖检镜下观察结果显示恢复期观察时间内，局部的肌肉刺激反应具有完全可逆性。结论丹参酮ⅡA 磺酸钠注射液对家兔股四头肌无明显刺激性。

大鼠经皮电阻试验方法研究

李丽, 郭玉东, 栗景蕊, 胡宇驰, 曹春然

2015, 32(06): 26-28.

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摘要: 目的评价改良的大鼠经皮电阻试验方法的可行性。方法取28 ～ 30 日龄大鼠背部皮肤制成直径约20 mm的皮片，筛选电阻值大于20 kΩ 的皮片用于试验。8 个受试物，每个受试物设3 个平行样，分别取150 μL 样品加至皮片表皮层，作用24 h。然后洗去受试物，测定皮片电阻值，对电阻值≤15 kΩ 的皮片进行罗丹明B 染色、提取、565 nm测定吸光度值，计算皮片染料吸收量，进而判定受试物的腐蚀性。结果与传统动物试验方法结果比较，改良的大鼠经皮电阻试验方法灵敏度为100%、特异度83%、准确度88%，均符合经济合作与发展组织对该方法的要求。结论改良的大鼠经皮电阻试验方法在本实验室是可行的。

猫耳部肿瘤病理诊断及分析

黎砚书, 赵颖, 程广宇, 周向梅, 赵德明, 杨利峰

2015, 32(06): 29-33.

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摘要: 目的对8 例猫耳部肿物进行病理学诊断和分析，探讨猫耳部肿瘤发生的规律。方法中国农业大学教学动物医院2009 ～ 2015 年进行手术治疗的8 例猫耳部肿物，制成切片，根据病理学观察进行诊断并分析其组织来源、年龄及发生部位的规律。结果猫耳部鳞状细胞癌、耵聍腺瘤/癌和肥大细胞瘤发生比率均各占25%、25%、37. 5%; 猫耳部肿瘤0 ～ 4. 9 岁发生占12. 5%，5 ～ 9. 9 岁占37. 5%，≥10 岁占50%; 肿瘤均发生于外耳，中耳和内耳未见。结论耳部好发鳞状细胞癌、耵聍腺瘤/癌和肥大细胞瘤; 猫耳部肿瘤发病率随年龄增长呈上升趋势，易发生在中老年; 耳部肿瘤易发生在外耳。

DAP 玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存

刘科, 施赫赫, 杨林, 代路路, 夏冠玲, 王刚

2015, 32(06): 34-37.

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摘要: 目的探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果，建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术。方法选择3 个品系( C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － ) SPF 级4 周龄雌性小鼠，运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法，以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法，观察上述实验效果。结果C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － 3 个品系小鼠超数排卵平均值分别为42. 98 个/只、27. 93 个/只、23. 11 个/只，体外受精2-细胞期胚胎率分别为68. 79%、32. 70%、23. 08 %，胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72. 77%、80. 87%、83. 33%，存活率分别为56. 92%、54. 84%、70%，存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72. 37%、60. 78%、25%。结论选择4 周龄小鼠，按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏，呈现出较好效果，C57BL/6 小鼠优于基因工程小鼠，基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术。

长爪沙鼠仙台病毒( SeV) 抗体ELISA 检测方法的建立与应用

王吉, 卫礼, 付瑞, 李晓波, 王淑菁, 巩薇, 岳秉飞, 贺争鸣

2015, 32(06): 39-43.

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摘要: 目的建立长爪沙鼠仙台病毒( SeV) 抗体ELISA 检测方法，用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚，接种SeV，制备鸡胚尿囊液正常抗原和SeV 特异抗原，滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度，并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0. 1 μg /mL、2 μg /mL 和1∶ 5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为9. 6% 和8. 4%，批间平均变异系数分别为9. 0% 和5. 9%; 检测灵敏度为1∶ 10 240; 与沙鼠小鼠肝炎病毒( MHV) 、小鼠肺炎( PVM) 、呼肠孤病毒3 型( Reo3) 均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA 方法特异性、敏感性强，重复性、稳定性好，检测结果，准确、可靠。可用于长爪沙鼠体内SeV 抗体的检测。

氨浓度检测的溯源验证实验

宗阿南, 吴腾飞, 杨葳, 王光, 赵文

2015, 32(06): 44-46.

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摘要: 目的在采用纳氏试剂比色法进行动物室氨浓度检测时用国家标准物质进行验证，以保证实验室检测结果的准确性。方法取十份样品分别用氨标准样品与实验室配置的氨溶液进行平行实验，同时绘制氨标准曲线进行比对。结果实验室配置的氨溶液标准曲线与氨标准样品标准曲线的偏差为－ 1. 79%。结论氨浓度检测受多种因素影响，为使检测结果准确性和一致性得以保证，应进行实验室验证、校准工作。

实验动物标本制作及其在实验动物学教学中的作用

汪永锋, 徐晓艳, 高秉琴, 张延英

2015, 32(06): 47-49.

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摘要: 本文介绍了实验动物标本制作的方法和制作流程，并说明了实验动物标本制作在实验动物学教学中的应用。

实验动物从业人员培训考核系统的应用与推广

王锡乐, 迟晓丽, 刘文菊, 刘执寅, 刘新艺, 吕建, 李根平

2015, 32(06): 50-55.

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摘要: 实验动物从业人员培训考核系统的7 个子系统已经全部建立起来，并在推广中不断完善。其中，实验动物从业人员上岗证考试系统于2014 年4 月份正式在北京地区推广使用，到2015 年6 月底，北京举行99 场考试，参考7 439人，合格人数为6 709 人，合格率95. 35%; 同时，黑龙江、内蒙、天津、辽宁、陕西和四川等地也已组织考试或正在准备采用该系统考试。实验动物从业人员培训考核管理系统的推广和应用，规范了不同省市间实验动物人员培训内容，统一了考核标准，达到了全国实验动物从业人员素质评价的一致性。

TSE-1 基因缺陷小鼠出现肺泡II 型细胞异常表型

徐琳凯, 董浩迪, 朱婷, 赵德明, 杨利峰

2015, 32(06): 56-58.

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摘要: 肺泡II 型上皮细胞( AT II) 是肺泡表面的一类重要细胞，正常情况下不易被直接观察到。现在发现一种基因敲除小鼠( TSE-1) 的肺脏内出现肺泡II 型细胞增多且体积明显增大的现象。本文对这一现象结合图片进行了介绍，并总结了肺泡II 型细胞的生理功能和可能与TSE-1 的关系。在转基因小鼠中的该发现可使大量AT II 在光镜下直接被观察到，使关于AT II 的动物实验敏感性升高，为未来的肺病生理研究提供了动物模型和物质基础。

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