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2016年 第33卷 第04期    刊出日期：2016-08-31

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研究 论著

不同福利条件下ICＲ 小鼠肝细胞NF-κB 表达的比较

梁磊, 马畅, 董敏, 尤金炜, 胡文娟, 恽时锋

2016, 33(04):  1-5. 

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摘要: 目的比较不同福利水平下ICＲ 小鼠肝脏NF-κB 的表达。方法选取6 周龄雄性ICＲ 小鼠，交叉使用制动和丰富环境干预形成不同的福利环境，观测小鼠的体质量增重、饲料能效及脾脏系数，ELISA 法测定血清IL-2 和COＲT，实时定量PCＲ 和免疫印迹法分别检测小鼠肝细胞内NF-κB p65 的mＲNA 和蛋白表达水平。结果与对照组相比，丰富环境组小鼠的体质量增重显著提高( P ＜ 0. 05) ，其他指标无差异( P ＞ 0. 05) ; 丰富环境+ 制动组小鼠的体质量增重、脾脏系数显著低于对照组( P ＜ 0. 05) ，而COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达显著高于对照组( P ＜0. 05) ; 制动组的体质量增重、饲料能效、脾脏系数及血清IL-2 均显著低于对照组( P ＜ 0. 05) ，COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达均显著高于对照组( P ＜ 0. 05) 。其中制动组的体质量增重显著低于丰富环境+ 制动组( P ＜0. 05) ，COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达显著高于丰富环境+ 制动组( P ＜ 0. 05) 。结论不同组别小鼠存在福利水平差异，NF-κB 表达差异与福利差异相类似，福利水平与NF-κB 表达水平之间存在紧密关联。

红景天苷对压力负荷型慢性心衰大鼠心脏的作用及机制

王晨阳, 曹雪滨, 曹海涛, 徐鹏

2016, 33(04):  6-10. 

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摘要: 目的研究红景天苷对压力负荷型慢性心衰大鼠心电图的作用及可能的机制。方法30 只雄性SD 大鼠随机分成假手术组( S 组) 、心衰组( HF 组) 、红景天苷组( SAL 组) ，每组10 只大鼠。HF 组、SAL 组采用腹主动脉缩窄法制备模型，S 组只穿线不缩窄。SAL 组术后12 周给予红景天苷皮下注射， 60 mg /kg·d，共30 d。假手术组和心衰组给予同等剂量的生理盐水。给药30 d 后，Ⅱ导联心电图检测肢体导联并统计分析数据。将大鼠麻醉后，腹主动脉抽血离心后取血清，按试剂盒方法测定超氧化物歧化酶( SOD) 、B 型钠尿肽( BNP) 、丙二醛( MDA) 。结果术后12 周，心电图检测显示几个特点: SAL 组和HF 组比较: 1) 心率和P 波振幅有明显降低( P ＜ 0. 05) ; 2) Ｒ 波振幅明显减小( P ＜ 0. 05) ; 3) 心电图的J 点位移明显降低( P ＜ 0. 05) ，而ST 高度则明显抬高( P ＜ 0. 05) 。血清酶的检测结果发现，和心衰组相比，SAL 组大鼠血清中的SOD 值明显增加( P ＜ 0. 05) ，BNP 值则明显降低( P ＜ 0. 05) 。结论 红景天苷可以改善心衰大鼠的心功能，减轻心肌细胞的损伤，其机制可能与抗氧化作用相关。

两株小鼠诺如病毒的分离与鉴定

马畅, 张旭亮, 刘捷, 恽时锋

2016, 33(04):  11-17. 

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摘要: 目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒( murine norovirus，MNV) 的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠，采集直肠及内容物样本，应用ＲT-PCＲ 方法检测MNV OＲF2 特异性基因( 547bp，MNV nt5104-5650) 。阳性样本经ＲAW264. 7 细胞分离病毒，对MNV 分离株的VP1 基因进行扩增，将其连接在pEASY-Blunt 载体上，转化至大肠杆菌Trans1-T1 感受态细胞，通过Kanamycin 抗性筛选，挑取菌落进行PCＲ鉴定，鉴定为阳性的克隆送检测定其VP1 基因序列，构建系统发生进化树。结果共检测小鼠直肠内容物30 份，检出MNV 阳性样本4 份，包括ICＲ 小鼠( 2 /8) 、BALB/c 小鼠( 1 /12) 和C57BL/6J 小鼠( 1 /10) ，感染率为13. 3%;ＲAW264. 7 细胞接毒盲传三代，两只ICＲ 小鼠样品接种的细胞产生明显细胞病变( CPE) ，表现为细胞圆缩聚集，大部分脱落死亡，而C57BL/6J 和BALB/c 小鼠样本接种ＲAW264. 7 细胞无CPE; 应用VP1 特异引物经ＲT-PCＲ 检测，表现CPE 的细胞样本出现特异条带，测序结果显示分离到的2 株MNVVP1 核酸序列均为1626bp，与引物设计参考毒株S7-P2( GenBank 登录号: AB435514) VP1 基因大小相同，进化树图表显示检测到的2 株MNV 属同一独立小分支与参考株BJ10-2062、CＲ4 最为相近。结论此次抽检的实验小鼠MNV 感染率为13. 3% ( 4 /30) ，考虑可能在同一设施内传播。常用实验小鼠携带病毒的生物学意义有待进一步研究。

ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体的建立

赵亚, 吴朋朋, 张彩勤, 谭邓旭, 赵勇, 白冰, 张海, 师长宏

2016, 33(04):  18-26. 

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摘要: 目的建立ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷的CＲG 小鼠杂交群体。方法将ＲAG2 基因缺陷小鼠与IL2ＲG 基因缺陷小鼠分别进行繁殖，选取ＲAG2 基因缺陷雄鼠ＲAG2( － / － ) 与IL2ＲG 基因缺陷雌鼠IL2ＲG( － / － ) 进行配对，培育杂交后代，通过PCＲ 扩增基因组ＲAG2 和IL2ＲG 基因进行鉴定; 应用流式细胞仪分析检测ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠外周血T 细胞( CD3 + ) 、B 细胞( CD19 + ) 和NK 细胞( CD49b + ) 含量; 并测定8—12 周龄ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠血液生理生化及主要脏器重量指标。结果成功繁育ＲAG2 基因缺陷小鼠和IL2ＲG 基因缺陷小鼠，筛选获得稳定的ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠并成功保种和扩群; 该双基因缺陷小鼠外周血淋巴细胞中T 细胞、B 细胞，NK 细胞比例显著降低( P ＜ 0. 05) ; 与相同周龄野生型C57BL/6 相比9 项血清生化指标无明显变化( P ＞ 0. 05) ; 18 项血液生理指标中红细胞( ＲBC) 和血红蛋白( HGB) 含量显著降低( P ＜ 0. 05) ; 白细胞( WBC) 、淋巴细胞数( LYMPH) 、淋巴细胞比率( LYM) 、单核细胞、中性细胞数( NEUT) 降低极显著( P ＜ 0. 01) ; 脾脏重量显著均低于野生型C57BL/6 小鼠( P ＜ 0. 05) ; 人肝肿瘤传代细胞移植于ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠后，肿瘤移植成功率和生长速率均明显高于亲本单基因缺陷小鼠( P ＜ 0. 05) ，成功获得了临床肝癌病人肿瘤组织的异种移植模型。结论 成功构建筛选出ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体。

采用相对饱和深度评价潜艇脱险减压病危险性的动物模型研究

陈锐勇, 李慈, 何佳, 陈海庭, 廖昌波, 许骥, 刘晓波, 唐瑛

2016, 33(04):  27-31. 

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摘要: 目的观察相同减压负荷的模拟潜艇脱险( simulated submarine escape，sSE) 暴露和相对饱和深度( equal air depth，EAD) 饱和减压暴露减压反应程度的差异，评估采用EAD 饱和减压动物模型对潜艇脱险减压负荷的评价效果。方法山羊12 只，分为4 组，分别给予7 m 饱和后模拟150 m 潜艇脱险( 1 组，EAD = 12. 4 m) 、12. 4 m 饱和后直接减压( 2 组) 、12 m 饱和后模拟150 m 潜艇脱险( 3 组，EAD = 17. 1 m) 和17. 1 m 饱和后直接减压暴露( 4组) ，暴露前后采血检测血常规、血凝和NO、iNOS，暴露后15 min 观察行为表现并进行血管内气泡检测，观察动物存活情况。结果相同EAD 不同处理组间血管内气泡Spencer 分级、血常规和血凝指标、NO 和NOS 无显著性差异( P ＞ 0. 05) ; EAD 大的处理组( 3 组、4 组) 动物死亡率高( 50% ) ; 4 组较1 组PT 显著增加( P ＜ 0. 01) ，较2组APTT、PT 显著增加( P ＜ 0. 05) ; EAD 为17. 1 m 的实验组NO 含量显著高于EAD 为12. 4 m 的实验组( P ＜0. 01) 。结论采用EDA 计算不同压力预饱和暴露后的模拟潜艇脱险的减压负荷是可行的。红细胞的流变学变化和血管活性因子可能在机体的减压应激反应中起到了一定的作用，这为开展减压应激标志物的研究提供了参考。

水动力转染技术建造慢性乙型肝炎动物模型特效研究

程怡, 王翠玲, 刘光泽, 李秀梅, 庄彩芳, 佟明华

2016, 33(04):  32-36. 

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摘要: 目的比较不同质粒建立的水动力转染乙型肝炎小鼠模型的特性。方法将pcDNA 3. 1-1. 3-HBV-C 与PAAV-1. 2-HBV-A 两种质粒通过水动力转染法建立两种乙型肝炎小鼠模型，通过对建模成功率和小鼠外周血HBsAg 滴度及稳定性，T 细胞指数流式等检测分析，比较不同模型差异和特效。结果转染pcDNA3. 1-1. 3-HBV-C质粒建模成功率为78. 6%，转染后体内HBsAg 滴度最高达到220IU/mL; 转染PAAV-1. 2-HBV-A 质粒建模成功率为56%，转染后体内HBsAg 滴度最高达到2 300IU/mL。建模小鼠的肝脏进行切片，做免疫组化后，观察实验结果，转染pcDNA 3. 1-1. 3-HBV-C 质粒的小鼠肝脏切片的HBsAg 免疫组化较PAAV-1. 2-HBV-A 质粒小鼠颜色面积更大。实验小鼠转染质粒后6 周的外周血进行流式细胞术检测，结果显示特异性T 细胞CD4 +、CD8 + 和正常小鼠比较，两种质粒的造模小鼠未有差别。结论利用水动力转染法用不同质粒建造乙型肝炎小鼠模型在乙肝病毒指标水平和稳定性方面有着显著差异。

红藻氨酸致癫痫大鼠不同时点神经生长因子变化研究

王红义, 冯小明, 郭晓宇, 陆 璐, 申 健, 肖 攀, 牛廷献

2016, 33(04):  37-40. 

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摘要: 目的 探讨红藻氨酸( Kainic Acid，KA) 致癫痫大鼠癫痫发作过程中海马组织神经生长因子( nerve growth factor，NGF) 不同时间点表达量的变化。方法 腹腔注射 KA 建立大鼠癫痫模型。采用 TaqMan 探针实时定量 PCＲ ( Ｒeal-time quantitative PCＲ) 技术，检测注射 KA 后不同时点大鼠海马组织中 NGF 表达量的变化。结果 与 NGF 表达量与生理盐水对照组( NS) 相比，6 ～ 12 h NGF 表达量明显低于 NS 组( P ＜ 0. 05) 、48 ～ 72 h NGF 表达量开始升高并高于 NS 组，在 24、72 h 时其表达量显著高于 NS 组( P ＜ 0. 05) 。结论 NGF 对致癫大鼠的海马具有修复与保护作用。

两种胰蛋白酶酶解羊肌肉总蛋白样品的质谱分析

邹家云, 姜棋予, 邬顺全, 胡燕, 陈凌声, 杨锐创, 柴燕涛, 李晓娟, 李瑞生, 侯俊

2016, 33(04):  41-47. 

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摘要: 目的比较国产和进口两种胰蛋白酶对蛋白质的酶解效果，为后续蛋白质组学稳定研究提供依据。方法用超声破碎法提取羊肌肉组织总蛋白，经两种胰蛋白酶酶解后液相色谱串联质谱检测酶解肽段，将结果上传蛋白质序列数据库，利用质谱分析鉴定方法分析比较两种胰蛋白酶的酶解效果，并借助生物信息学工具对所得数据进行分析。结果两种胰蛋白酶酶解同种蛋白质样品产生的肽段长度86%以上均为6—18 个氨基酸，适用于质谱检测。酶解后肽段产生的质量国产胰蛋白酶优于进口胰蛋白酶，国产胰蛋白酶比进口胰酶酶解可多鉴定到19% 的蛋白质和34%的肽段。结论进口、国产的胰蛋白酶在酶解蛋白质方面均可用于质谱检测前蛋白质的酶解消化。但国产胰蛋白酶价格明显低于进口胰酶，更具应用优势。本研究为评价胰蛋白酶酶解效果提供了一种有效、全面的研究方法。

沙漠干热环境不同温度对创伤失血性休克猪生存时间的影响

沈才福, 刘江伟, 钱若筠, 安宗仁, 段越, 是文辉, 董翔, 许永华

2016, 33(04):  48-51. 

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摘要: 目的探讨沙漠干热环境下不同温度对创伤失血性休克猪生存时间的影响，为进一步的研究提供理论依据。方法选取雄性的长白仔猪30 头( 25—35 kg) ，随机分为常温实验组( 环境温度25℃ ± 1℃，湿度35% ± 5%，n =10) ，干热环境Ⅰ组( 环境温度40. 5℃ ± 0. 5℃，湿度10% ± 2%，n = 10 头) ，干热环境Ⅱ组( 环境温度41. 5℃ ±0. 5℃，湿度10% ± 2%，n = 10 头) 。将实验动物置于人工实验舱内，按实验设计设置相应的环境参数，分别在各自环境暴露3 h，建创伤失血性休克模型，观察生命体征及死亡时间。结果1． 常温组创伤失血性休克后体温较长时间稳定在一定水平，稳定期后呈进行性下降; 而干热Ⅰ组休克后缓慢上升，两相邻时间点温度无显著差异; 干热Ⅱ组模型成功后体温很快升至42℃，一直呈快速上升趋势，直至动物死亡，相邻两时间点体温差异显著。2． 常温组模型成功后三组的平均存活时间分别是( 567 ± 16. 9) min、( 178 ± 3. 6) min、( 61 ± 2. 8) min，三组平均生存时间差异显著。结论1． 沙漠干热环境创伤失血性休克存活时间明显短于常温环境，提示沙漠干热环境可加速创伤失血性休克动物死亡; 2． 而沙漠干热环境Ⅱ组存活时间更短，提示在沙漠干热环境下，环境每升高1℃，可明显缩短创伤失血性休克猪的生存时间。3． 体温升高的速度与死亡速度呈正相关，温度升高越快死亡时间快，生存时间越短，提示沙漠干热环境创伤失血性休克救治过程中有效地控制体温可能具有重要的临床意义。

基因工程小鼠制备和保种、育种技术研究

张彩勤, 赵亚谭, 邓旭, 张海, 赵勇, 白冰, 刘佩娟, 辛智倩, 师长宏

2016, 33(04):  52-57. 

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摘要: 本文从小鼠的超数排卵、采集胚胎、原核受精卵显微注射、胚胎移植、基因型鉴定等多个环节，详细阐述制备基因工程小鼠的技术操作要领; 通过实施辅助生殖技术IVF( 体外受精) 、精子和胚胎的冷冻、复苏技术实现了基因工程小鼠的保种和育种，涉及相关技术的要点改进和操作体会，成功建成了基因工程小鼠的制备和保种、育种平台，提供了良好的技术服务。

急性低氧暴露下大鼠脑组织的病理学改变及脑IL-6、TNF-α 的表达变化

是文辉, 许永华, 宋来阳, 董翔, 李建瑛, 张东辉, 陶义存

2016, 33(04):  58-62. 

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摘要: 目的探讨在模拟高原环境中，急性低氧暴露大鼠脑组织的病理学改变及IL-6、TNF-α 的表达变化。方法 SD 大鼠50 只雌雄各半，实验分5 组。分别是常压对照组，急性低压低氧暴露1 d 组、2 d 组、3 d 组以及7 d 组，暴露后测定大鼠脑干湿重比，脑组织中TNF-α、IL-6 含量及病理学改变。结果与正常对照组相比，暴露1 d 组、2 d 组、3 d 组大鼠脑干湿重比、脑组织中IL-6、TNF-α 升高( P ＜ 0.05) 。暴露7 d 组脑组织含水量、脑组织中IL-6、TNF-α 均显著低于暴露3 d 组( P ＜ 0． 05) 。病理结果显示正常对照组脑组织细胞形态结构及组织间隙正常，暴露3 d 组脑组织分子层、锥体细胞周围、血管周围、脉络丛以及脑膜下水肿，暴露7 d 组脑组织分子层水肿较3 d 组减轻。结论 在模拟海拔5 km 低压低氧环境中，SD 大鼠的脑组织的病理学改变以及干湿重比、TNF-α、IL-6 因子含量均在3 d 时显著改变和升高，但随着暴露时间的延长，损伤程度有所降低，这和平原人群进入高原后所产生的低氧习服机制相同。故该研究所选择观察的SD 大鼠脑组织的形态学改变以及检测脑组织中TNF-α、IL-6 含量改变可作为急性高原病模型是否成模的判定指标。

桃核承气汤对肝性脑病大鼠肠道菌群的影响分析

李瑞生, 李晓娟, 王仲霞, 王立福, 杜宁, 朱云, 孙永强, 景婧, 王丽苹, 王睿林, 张萍

2016, 33(04):  63-66. 

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摘要: 目的研究桃核承气汤对肝性脑病大鼠肠道菌群是否存在相关的影响。方法本实验对40 只SD 大鼠采用腹腔注射硫代乙酰胺( TAA) 和口腔灌胃该中药方剂汤的方法，观察大鼠的神经HE 分级和血氨的作用，以及对肠道菌群的影响。结果各剂量组不同程度地可降低大鼠HE 级别和血氨的浓度，空肠和回肠的细菌计数与模型组相比呈下降趋势且P ＜ 0. 05，对空回肠菌群具有显著的回调作用。同时各剂量组的双歧杆菌和大肠杆菌也出现回调和B/E 值增高的现象。结论该方剂汤对肝性脑病大鼠的肠道菌群具有正向的影响作用，可增加胃肠道的定植抗力作用。

创伤对机体脂质过氧化及抗氧化能力影响的实验研究

李大鹏, 张霞, 吕春雷, 王凤娇, 郑文哲

2016, 33(04):  67-69. 

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摘要: 目的探讨创伤对机体脂质过氧化及抗氧化能力的影响。方法选择普通级新西兰兔11 只采集血样，采集后双侧耳缘小静脉反复穿刺，隔日1 次，连续2—3 次，建成创伤模型后采集血样，检测建模前后2 组血清丙二醛( MDA) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、过氧化氢酶( CAT) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 、总抗氧化能力( T-AOC) 指标，并予以统计分析。结果MDA: A 组( 3. 048 ± 1. 259) nmol /L，B 组( 3. 251 ± 1. 695) nmol /L，A 组水平低于B 组;T-SOD: A 组( 384. 314 ± 50. 122) U/mL，B 组( 348. 942 ± 45. 852) U/mL，A 组水平高于B 组; CAT: A 组( 6. 121 ±4. 097) U/mL，B 组( 4. 563 ± 2. 223 ) U/mL，A 组水平高于B 组; GSH-Px: A 组( 377. 808 ± 72. 726 ) U/mL，B 组( 349. 942 ± 54. 021) U/mL，A 组水平高于B 组; T-AOC: A 组( 5. 537 ± 2. 128) U/mL，B 组( 4. 633 ± 2. 074) U/mL，A组水平高于B 组; 组间差异均无统计学意义( P ＞ 0. 05) 。结论创伤对机体脂质过氧化及抗氧化能力具有一定影响，但无显著性影响。

福建省实验动物从业人员培训基地建设的实践与设想

郑和平, 叶碧海, 何俊智, 马雷, 温福利, 张诗兰, 翁顺太

2016, 33(04):  70-73. 

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摘要: 开展实验动物从业人员培训是提高“实验动物标准化”和“动物实验规范化”的出发点和落脚点。本项目针对我省前期培训条件薄弱与覆盖面有限的缺憾，结合外省市成功经验，借鉴驾照与职称等考试的理念，筹建并申报了“福建省实验动物从业人员培训基地”，建立了“岗位证书”培训考试系统; 编写了不同对象的培训教材和教学大纲; 举办了4 期实验动物从业人员培训班、1021 人获得“岗位证书”; 探索分析了培训基地建设与实践的经验和不足，为我省以后开展实验动物从业人员培训奠定了基础。

高能氙光传递窗的杀菌效果研究

白冰, 王新华, 康生, 赵勇, 张彩勤, 张海, 师长宏

2016, 33(04):  74-77. 

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摘要: 目的研究高能氙光传递窗对空气中和物品表面细菌的消毒效果。方法分别用标准菌株金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希菌制备细菌悬液并涂布血平板，模拟物品表面细菌; 用普通营养琼脂平板培养空气落下菌。将两种平板经氙光传递窗和紫外线分别照射3 min 后，与对照组均放置于37℃恒温培养箱24—48 h，计算杀菌率。结果涂布于血平板的细菌悬液，经氙光照射3 min 后，平均杀菌率达到93. 2%; 空气落下菌经氙光照射3 min后，平均杀菌率达到99. 1%。两种平板经紫外线照射3 min 后的杀菌率不到50%。结论氙光传递窗能够高效、快速杀灭物品表面和空气中的细菌，平均杀菌率达到95%以上，氙光传递窗有可能成为常规传递窗的替代品。

人源性肿瘤异种移植的小鼠模型在肿瘤精准医学中的应用

邱业峰, 赵志兵, 法云智

2016, 33(04):  78-83. 

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摘要: 人源性肿瘤异种移植( PDX) 的小鼠模型使用至今已有近半个世纪的历史，是肿瘤学研究领域中的重要工具之一。与传统细胞株荷瘤小鼠模型不同的是，PDX 小鼠模型最大程度上保留了患者体内肿瘤真实的基因组、转录组、蛋白组学以及异常的信号通路特征，被广泛用作肿瘤患者的替代模型进行个性化药物筛选等诸多方面的研究。近年来，随着肿瘤精准医学概念的提出，对PDX 小鼠模型的需求和利用正日益扩大，尤其是借助于PDX 小鼠模型进行肿瘤有效药物的筛选和评估，并逐步将其应用于指导肿瘤患者的个体化治疗，正逐步走向临床。本文就PDX小鼠模型制备的关键因素、临床应用和潜在的不足进行综述。