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2016年 第33卷 第02期    刊出日期：2016-04-30

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研究 论著

糖尿病基础上的脓毒症模型

贺能英, 殷惠梅, 陈珍, 林海焕, 郑一玮, 苏和毅

2016, 33(02):  1-5. 

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摘要: 目的观察糖尿病( DM) 对脓毒症炎症反应的影响。方法高糖高脂饮食喂养联合链脲佐菌素( STZ) 制备糖尿病大鼠模型，在此基础上通过盲肠结扎穿孔术( CLP) 建立脓毒症模型。留取心脏组织和全血标本，ELISA 检测炎症因子TNF-α，中性粒细胞百分比计数，观察心脏组织糖原染色。结果( 1) 糖尿病模型: 与正常大鼠相比，糖尿病大鼠出现多饮、多食、多尿、体质量减轻的典型“三多一少”症状，血糖和体质量显著升高( P ＜ 0. 001) ; 心肌糖原染色结果显示: 正常大鼠心肌细胞核染色，间质细胞及血管无染色; 糖尿病大鼠心肌细胞和心肌微血管均染色且血管壁增厚，血管周围细胞核明显深染。( 2) 糖尿病基础上的脓毒症模型，造模后大鼠出现异常的行为活动和精神状态; Normal-CLP 组血清TNF-α 值显著高于Normal-Control 组( P ＜ 0. 01) ，明显高于Normal-Sham 组( P ＜ 0. 05) 。DM-CLP 组血清TNF-α 值显著高于DM-Control 组( P ＜ 0. 01) ，明显高于DM-Sham 组( P ＜ 0. 05) ; Normal-CLP 组外周血中性粒细胞百分比显著高于Normal-Control 组和Normal-Sham 组( P ＜ 0. 01) ，DM-CLP 组外周血中性粒细胞百分比显著高于DM-Control 组和DM-Sham 组( P ＜ 0. 01) 。结论正常大鼠和DM 大鼠对脓毒症的炎症反应是不一致的，这可能与正常大鼠和DM 大鼠体内免疫状态相关。

实验红鲫对137Cs 辐射的氧化应激响应

彭赞平, 陶宏婷, 廖小立, 吴端生

2016, 33(02):  6-13. 

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摘要: 目的探讨实验红鲫对137 Cs 辐射的氧化应激响应和氧化应激生物标记物。方法实验红鲫分别以0 Gy、1. 94 Gy、3. 88 Gy、7. 76 Gy、15. 53 Gy137Cs 辐照，分别于24 h，48 h，72 h，96 h 取出肝脏、性腺，按试剂盒方法检测SOD、GSH-PX 活性，于7 d 和14 d 取出肝脏、肾脏、心脏、脑，按Western blot 方法检测HSP70 含量。结果1. 94 Gy至15. 53 Gy137Cs 辐照能引起实验红鲫氧化应激，SOD、GSH-PX 活性和HSP70 含量发生改变。1. 94 Gy137Cs 辐照诱导实验红鲫肝脏SOD 活性升高， 3. 88 Gy、7. 76 Gy、15. 53 Gy137Cs 辐照诱导实验红鲫肝脏SOD 活性下降，且随辐射剂量升高，其SOD 活性逐渐降低。1. 94 Gy 以上137Cs 辐照诱导实验红鲫性腺SOD 活性下降，并随辐射剂量升高和时间的延长而下降，且下降幅度较大。各辐照处理组实验红鲫肝脏和性腺的GSH-PX 活性变化不大，表现出随辐射剂量升高则活性降低的变化趋势。137Cs 辐照处理后7 d 和14 d，各辐照处理组实验红鲫肝脏、肾脏、心脏和脑的HSP70 表达量均比对照组的高，且随着137Cs 辐照剂量的增加和时间的延长而升高，均存在着一定的“剂量－ 时间－效应”关系。结论实验红鲫性腺对137Cs 辐射的氧化应激响应较敏感，性腺SOD 和肝脏或肾脏的HSP70 可作为氧化应激标志物。

鱼油中EPA 与DHA 不同配比对降血脂作用效果的比较

严家荣, 李赟, 钟志勇, 刘盛来, 孙侠, 唐小江

2016, 33(02):  14-19. 

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摘要: 目的通过高脂血症大鼠模型研究鱼油中二十碳五烯酸( EPA) 与二十二碳六烯酸( DHA) 的不同配比在降血脂方面的变化。方法给予70 只雄性SD 大鼠采用高脂高糖乳剂灌胃10 d，按总胆固醇( TC) 水平随机分为模型对照组、非诺贝特胶囊组( 28 mg /kg) 、海豹油组( 333 mg /kg) 、鱼油A( 167 mg /kg) 、鱼油C( 150 mg /kg) 、鱼油D( 183 mg /kg) 、鱼油E( 167 mg /kg) ， 10 只/组，每天给予高脂高糖乳脂及治疗，连续30d。治疗结束后，检测各组动物大鼠血清( TC) 、甘油三酯( TG) 、高密度脂蛋白( HDLC) 、低密度脂蛋白( LDLC) 、白介素-2( IL-2) 、白介素-6( IL-6)及肝脏系数，并观察肝脏组织病理改变。结果与模型对照组相比， 0. 028 g /kg 非诺贝特胶囊可以降低高脂血症大鼠的TC、TG、HDLC、LDLC 含量，减轻肝细胞脂肪变性程度，但可增大肝脏系数( P ＜ 0. 05 或P ＜ 0. 01) ; 海豹油可以降低TC、TG、HDLC、LDLC 含量( P ＜ 0. 01) ，鱼油A、鱼油E 可以降低TC、HDLC、LDLC 含量( P ＜ 0. 01) ，鱼油D 可以降低TC、TG、HDLC、LDLC 含量( P ＜ 0. 01) ，但海豹油、鱼油A、鱼油C、鱼油D、鱼油E 均未见减轻肝细胞脂肪变性程度( P ＞ 0. 05) 。结论对于高脂血症大鼠模型，鱼油A、鱼油E 均具有降低TC、HDLC 和LDLC 的作用，鱼油D具有降低TC、TG、HDLC、LDLC 的作用，鱼油C 不具有降低TC、TG、HDLC、LDLC 的作用。

左卡尼汀注射液安全性评价的研究

刘莹, 邢桂兰, 杨照新, 姚茂忠, 符健

2016, 33(02):  20-24. 

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摘要: 目的评价左卡尼汀注射液( 5 mL: 1. 0 g) 临床用药的安全性。方法血管刺激性试验采用耳缘静脉注射，同体左右侧自身对比的方法; 试验用兔红细胞混悬液与供试品温育，观察溶血情况; 用左卡尼汀注射液( 5 mL:1. 0 g) 在190 mg /kg 和95 mg /kg 剂量条件下进行致敏3 次，并用2 倍体积致敏浓度进行激发时均未见过敏反应症状，与平行对照品在相同剂量和浓度下进行比较; 左卡尼汀注射液( 5 mL: 1. 0 g) 在高剂量190 mg /kg 和低剂量95 mg /kg时进行被动皮肤过敏试验。结果左卡尼汀注射液在对家兔红细胞混悬液( 体外试管法) 和血管刺激的情况下结果与平行对照品类似，无溶血作用，也无明显的血管刺激反应; 在主动过敏试验中豚鼠均未出现过敏反应症状，过敏反应为阴性; 被动皮肤过敏试验豚鼠均未出现蓝斑过敏反应症状，过敏反应阴性。结论左卡尼汀注射液( 5 mL∶ 1. 0 g) 临床用药符合注射用药的要求，可以做为安全性评价的根据。

SV40LT 基因过表达慢病毒载体的构建与包装

游颖, 沈欢欢, 马雨楠, 曾林

2016, 33(02):  25-28. 

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摘要: 目的构建SV40LT 基因过表达慢病毒载体，并对其进行慢病毒包装，为建立永生化的uncv 小鼠胚胎成纤维细胞奠定基础。方法从293T 细胞中获得SV40LT 基因，将其克隆到pLenti-GFP 质粒中，构建重组穿梭质粒pLenti-GFP-SV40LT，测序鉴定后分别将鉴定的阳性pLenti-GFP-SV40LT 和包装质粒pMD2. 0G 和psPAX2 共转染293T 细胞，包装产生慢病毒。结果SV40LT 基因过表达慢病毒载体的构建与包装成功。结论SV40LT 基因过表达慢病毒载体构建与包装的成功为uncv 小鼠胚胎成纤维细胞的永生化提供了工具。

鼠痘病毒TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 快速检测方法的建立与应用研究

高正琴, 岳秉飞

2016, 33(02):  29-36. 

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摘要: 目的建立快速、敏感、特异检测鼠痘病毒的TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 方法。方法针对鼠痘病毒血凝素HA 基因设计特异性引物和探针，构建含有HA 基因的标准质粒进行定量分析，建立TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 检测方法，评价其敏感性、特异性和稳定性。对临床标本中的鼠痘病毒进行检测。结果研究结果显示，建立的鼠痘病毒TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 检测方法特异性为100%，与其他正痘病毒属病毒、非正痘病毒属病毒、细菌、真菌、寄生虫和细胞均无交叉反应。该技术灵敏度高，能精确定量检测鼠痘病毒DAN 线性范围达10 个数量级( 100—109 拷贝) ，最低检测限度为4 拷贝。该方法重复性非常好，组内变异系数和组间变异系数均小于3%。测试中相关系数、斜率和效率测量线性没有显著变化，表明该方法准确度高、精密度好。将其成功应用于临床标本中鼠痘病毒载量的定量检测，用普通PCＲ 和测序进行确证。整个检测过程可在2 h 内完成，可以用作快速诊断方法。结论本研究新建立的鼠痘病毒TaqMan MGB 探针实时荧光定量PCＲ 方法，具有快速简便、特异性强、灵敏度高的特性，适用于动物源性产品中鼠痘病毒检测、食品和药品安全检查、环境监测、流行病毒调查，为临床标本中鼠痘病毒的快速定量检测提供了一种特异有效的评价工具，值得推广应用。

导盲犬在活跃度测试中的心率变化规律研究

韩芳, 李雅婵, 赵明媛, 宋雅楠, 周子娟, 王亮, 王福金, 王爱国, 陈大朋, 王靖宇

2016, 33(02):  37-42. 

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摘要: 目的在Passive test ( PT) 行为测试中，评价导盲犬的心率变化特征，以期为导盲犬的前期筛选提供科学参考信息。方法选取中国导盲犬大连培训基地的66 只犬在培训前进行PT 测试，测试过程通过摄像头进行记录，其中37 只犬在训练结束后被基地认定为不适合成为导盲犬，即淘汰犬。心率信息采用ＲS800CX 心率表进行记录。结果PT 测试可以考察犬的活跃程度，测试中平均得分在导盲犬( 2. 0 ± 0. 11) 和淘汰犬( 3. 1 ± 0. 22) 之间具有显著性差异( P ＜ 0. 05) ，导盲犬相对活跃度低于淘汰犬。在整个测试中，心率变化的平均值在导盲犬组( 19. 5 ± 8. 45)与淘汰犬组( 19. 6 ± 11. 35) 之间没有显著性差异; 在活跃程度较低的犬中( PT 测试中得分在3 分以下) ，导盲犬的静息心率值显著大于淘汰犬。结论本研究显示在PT 测试中，具有成为导盲犬潜力的犬，其活跃度相对较低，静息心率相对较高，PT 测试结合心率的分析可以为导盲犬的前期筛选工作提供指导信息。

对SPF 大鼠脱毛实例的饲料影响研究

周蓓, 从美丽, 孙建新, 赵效国

2016, 33(02):  43-45. 

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摘要: 目的针对本中心SPF 级实验大鼠易发生的脱毛现象分析其原因，以对实验大鼠的养殖管理提供更加科学的建议。方法通过观察本单位SPF 实验大鼠脱毛的特点，对生长繁殖群常用大鼠饲料的灭菌效果和营养成分进行检测，结合检测结果改进饲料配方，进行治疗试验并观察效果。结果饲料高压灭菌后维生素和微量元素含量变化量较大，使用辐照灭菌饲料以及将维生素含量调整后大鼠脱毛改善情况最明显。结论饲料经过高压灭菌后营养中的维生素含量损失可能是造成SPF 大鼠脱毛的重要原因，在日常饲养中使用辐照饲料更加科学。

红花黄色素A 联用β 乳香酸对血瘀证大鼠全血粘度和凝血功能的影响

翟小虎, 李玉文, 王明明, 马忠英, 刘天龙, 张一凯, 尚沛津

2016, 33(02):  46-49. 

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摘要: 目的研究羟基红花黄色素A( HSYA) 联用β － 乳香酸( β － BA) 对血瘀证模型大鼠凝血功能和全血粘度的影响。方法将40 只SD 大鼠随机分为空白对照组( 等体积生理盐水) 、模型组( 等体积生理盐水) 、HSYA( 100 mg /kg) 组、β － BA( 200 mg /kg) 组、联合用药( HSYA 50 mg /kg + β － BA 100 mg /kg) 组，每12h 给药1 次，连续7 d。第5 次给药后给予大鼠皮下注射盐酸肾上腺素( 0. 7 mg /kg) 2 次，间隔4 h，中间给予冰水刺激以复制大鼠急性血瘀证模型。末次给药30 min 内取腹主动脉血检测凝血指标和不同切变率下的全血粘度指标( WBV) 。结果与空白对照组比较，模型组大鼠1 s，5 s，30 s，200 s 切变率全血粘度普遍升高，血浆凝血酶时间( TT) 、血浆凝血酶原时间( PT) 、活化部分凝血活酶时间( APTT) 缩短，纤维蛋白原( FIB) 含量增加，差异均有统计学意义( P ＜ 0. 05) 。与模型组比较，HSYA 组、β － BA 组、联合用药组大鼠1s，5 s， 30s， 200s 切变率全血粘度降低，血浆TT、PT、APTT 延长，FIB 含量减少，差异均有统计学意义( P ＜ 0. 05) 。结论HSYA 联用β － BA 能显著改善血瘀证大鼠凝血功能和在不同切变率下的全血粘度。

音乐与实验动物福利的研究进展

范尧, 谭冬梅, 韩文莉, 潘国强, 谭毅

2016, 33(02):  50-53. 

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摘要: 音乐治疗是音乐在艺术欣赏和审美领域之外的应用与发展，已经广泛运用于医疗、心理健康和特殊教育等领域。动物模型研究表明，音乐对动物生理、认知均有影响，提示音乐可以用来提高实验动物的环境丰富度，改善动物的福利水平。但是音乐在实验动物福利方面的应用十分滞后。基于音乐风格内容的多样性和动物听觉系统的差异，音乐对于实验动物的福利水平取决于音乐的类型和实验动物的品种。

实验动物仁慈终点技术研究的发展与应用

刘晓宇, 卢选成, 贺争鸣

2016, 33(02):  54-60. 

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摘要: 仁慈终点是指在不影响实验结果判定的前提下，“人为”确定一个节点( 或阶段) 并依此节点及时终止动物实验。国际上在仁慈终点方面已开展了较为系统的研究，并已将仁慈终点纳入到了实验动物管理与使用委员会的实际伦理审查和监督工作中。在我国， 2006 年科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》也要求在实验中实施仁慈终点。基于我国已开始重视实施“仁慈终点”，本文希望通过介绍国际实验动物仁慈终点研究及实践现况，使广大科研工作者对“仁慈终点”有更全面的了解，为我国搭建“仁慈终点”实践体系提供借鉴。

实验动物生产和使用中的福利保障技术

梁磊, 恽时锋

2016, 33(02):  61-65. 

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摘要: 动物福利是实验动物学科中的重要部分，随着学科的发展，现在已越来越受到科研工作者的重视。本文对实验动物生产与实验中常见的福利问题进行了归纳和分析，并介绍了可加以改善的措施和技术。

影像技术在动物实验中的应用

师长宏

2016, 33(02):  66-69. 

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摘要: 影像技术研究是借助于某种介质与机体的相互作用，把内部组织器官结构、密度以影像方式表现出来。常用的方法包括: X 线、CT、MＲI、超声、血管造影和生物发光等。人们通过各种影像技术可以连续、准确、甚至无创观察动物体内疾病变化，极大提升了实验研究水平，推动疾病检测由传统的解剖形态，向功能、代谢，甚至是受体和基因的分子水平发展，其中涉及的福利是指在整个影像检测过程中保证动物的康乐。目的就是在动物福利与“人类利益”之间找到平衡点。即关注影像检测中可能影响动物康乐的因素，从而减少动物的痛苦; 同时，当福利条件满足动物康乐时，可最大限度地发挥影像实验的效能。