实验动物科学 ›› 2017, Vol. 34 ›› Issue (05): 6-12.

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牛疱疹病毒Ⅰ型 PCR 检测方法的建立及在牛源样本检测中的应用

  

  1. ( 中国食品药品检定研究院 国家实验动物微生物遗传检测中心,北京 100050)
  • 出版日期:2017-10-31 发布日期:2017-11-17
  • 基金资助:

    <p>基金项目: 中国食品药品检定研究院 学科带头人基金项目( No. 2015X5)</p>

Establishment and Application in Bovine Origin Samples of PCR Method for Detection of Bovine Herpesvirus Type Ⅰ

  • Online:2017-10-31 Published:2017-11-17

摘要: 摘要: 目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型( BHV-1) PCR 检测方法,用于临床牛样本中 BHV-1 的检测。方法 根据已发表的 BHV-1 gB 基因保守区域设计合成引物,建立 BHV-1 PCR 方法,对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行方法学评价,并用建立的 PCR 方法检测 64 份牛临床样本。结果 建立的 BHV-1 PCR 检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型 ( BPIV3) 、猪伪狂犬病毒( PRV) 、单纯疱疹病毒Ⅰ型( HSV-1) 、犬疱疹病毒( CHV) 、均无交叉反应; 可检测病毒最小滴度为 5lg TCID50 /mL,对应的 DNA 模板浓度为 5. 26 × 102 拷贝/μL; BHV-1 DNA 在 - 30 ℃冰箱放置 12 个月仍可检测出目的条带。应用建立的方法检测 145 份牛源组织样本,BHV-1 核酸阳性率为 15. 2% 。结论 建立的 BHV-1 PCR 检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,适合于临床牛样本 BHV-1 的感染的检测。

关键词: <p>牛疱疹病毒Ⅰ型, 聚合酶链式反应, 牛源样本</p>

Abstract: Abstract: Objective To establish a PCR method for detection of Bovine herpesvirus type Ⅰ( BHV-1) in cow. Method The primers were designed and synthesized according to the published BHV-1 specific sequences of gB gene. PCR method was established,and the specificity,sensitivity,stability of this method were tested. Then the method was used to detect 64 cow’s clibical samples. Result The developed PCR method was no cross reaction with Bovine parainfluenza virus type Ⅲ ( BPIV3) ,Porcine pseudorabies virus ( PRV) ,herpes simplex virus 1 ( HSV-1 ) , Canine herpesvirus ( CHV ) ; its minimum detection limit the lowest detection virus titer is 5lg TCID50 /mL,the corresponding template DNA concentration was 5. 26 × 102 copies; BHV-1 DNA maintained at - 30 ℃ for 12 months,still can enlarge the fragment of about 247 bp visible purpose belt. The 145 cow’s clibical samples were 22 positive,and 123 negative about BHV-1 detected by PCR. Conclusion The developed PCR method is good in specificity,sensitivity,stability,and can be used for detecting the BHV-1 in cow’s clibical samples.

Key words: <p>Bovine herpesvirus type Ⅰ, PCR, bovine origin sample</p>

中图分类号: