原核系统表达的鸡白细胞介素-10 的鼠抗血清体内研究的初步分析

实验动物科学 ›› 2017, Vol. 34 ›› Issue (03): 1-5.

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原核系统表达的鸡白细胞介素-10 的鼠抗血清体内研究的初步分析

( 1．山西农业大学动物科技学院，太谷030801) ( 2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室，实验动物与比较医学团队，黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室，哈尔滨150069)

出版日期:2017-06-30 发布日期:2017-09-07
基金资助:
<p>基金项目: 国家科技支撑计划子课题( No． 2015BAI07B02-02)</p>

Preliminary Immunogenicity of Prokaryotic Expressed Chicken Interleukin-10 for in Vivo Ｒesearch

Online:2017-06-30 Published:2017-09-07

摘要/Abstract

摘要： 摘要: 目的获得鸡白介素-10( chIL-10) 的原核表达产物，制备鼠抗血清，分析与真核系统表达的chIL-10 的反应原性。方法采用ＲT-PCＲ从经脂多糖( LPS) 体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10 的基因，克隆至原核表达载体pET-30a( + ) ，成功构建原核重组质粒pET-chIL-10; 转化至大肠杆菌DH5α 中IPTG 诱导表达，切下含有重组蛋白的SDS-PAGE 胶条，免疫制备鼠抗血清; 分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10 真核表达细胞系CHO-euchIL-10F 和CHO-euchIL-10M 进行间接免疫荧光抗体试验( IFA) 和蛋白免疫印迹试验( Western blot) ，验证有无反应性。结果成功构建chIL-10 的原核表达载体pET-chIL-10，获得了高效价的鼠抗血清，能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10 特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词: <, p>, 鸡白介素-10, 原核表达, 鼠抗血清, 体内实验<, /p>

Abstract: Abstract: Objective To preliminarily analyze the immunogenicity of E． coli expressed chicken Interleukin-10 ( chIL-10) antiserum in stably chIL-10-expressing cell line transfected by chIL-10 gene with signal peptide ( CHOchIL- 10F) and that without signal peptide ( CHO-chIL-10M) ． Method Whole chIL-10 gene was amplified by PCＲ from chicken peripheral blood lymphocytes and cloned into pET-30a ( + ) vector to obtain recombinant plasmid of pET-chIL-10，followed by induce express in E． coli BL2l ( DE3) ． The SDS-PAGE gel containing foreign protein was immunized BALB /c mice to prepare antisera． Indirect immunofluorescent assay ( IFA) and Western blot assay were performed．Ｒesult The mice anti-pET-chIL-10 specific serum could react with eukaryotic expressed chIL-10 in IFA and Western blot assay． Conclusion Antiserum to prokaryotic expressed chicken IL-10 could be used in vivo research study．

Key words: <p>Chicken interleukin-10, prokaryotic expression, mice antiserum, in vivo assay</p>

中图分类号:

Q95 － 3

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