Abstract: Abstract:Objective To investigate the effect of 15-ketoeicosatetretraenoic acid(15-KETE) on EＲK1 /2 activity in rat pulmonary artery smooth muscle cells ( PASMCs) ． Method PASMCs of SD rats were collected by type I collagen plus elastase digestion，and cultured in control and defined media． The effect of 15-KETE on EＲK1 /2 activity in rat pulmonary artery smooth muscle cells was investigated by Western blot． Ｒesult 15-KETE had no effect on EＲK1 /2’s expression and activity at 10 － 6 mol /L from 0. 5 h to 24 h． But it could increase the expression of p-EＲK1 /2 after 0. 5，1，2，4 and 8 h incubation ( P ＜ 0. 05 ) ; 15-KETE，at concentration of 10 － 8— 10 － 6 mol /L，could significantly increase the expression of p- EＲK1 /2 ( P ＜ 0. 05) ; PD98059 and U0126，two specific inhibitors of EＲK1 /2，could significantly inhibit the effect of 15-KETE ( at concentration of 10 － 6 mol /L) on EＲK1 /2 activity ( P ＜ 0. 05 )，when PD98059 was added at 20 and 50 μmol /L and U0126 at 0. 1 and 1 μmol /L respectively． Conclusion 15-KETE has no effect on EＲK1 /2 expression，but can activate EＲK1 /2 in PASMCs and induce its phosphorylation in a time- and concentration-dependent manner． PD98059 and U0126 can inhibit the effect of 15 － HETE on EＲK1 /2 phosphorylation．

Key words: 15-KETE, extracellular signal-regulated kinase (EＲK), pulmonary artery smooth muscle cells

摘要： 摘要:目的从细胞分子水平上研究15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid，15-KETE)对大鼠肺动脉 平滑肌细胞上EＲK1 /2 的活性的影响。方法通过酶法分离、培养SD 大鼠肺动脉平滑肌细胞( pulmonary arterial smooth cells，PASMCs)，使用Western blot 技术观察15-KETE 对大鼠PASMCs 上EＲK1 /2 活性的影响。结果1) 10 － 6mol /L 15-KETE 作用从0. 5 h 到24 h 与对照组(未加15-KETE)比较，对EＲK1 /2 总量没有明显的影响。2)与 对照组比较，15-KETE 处理0. 5、1. 0、2. 0、4. 0、8. 0 h 明显增强p- EＲK1 /2( P ＜ 0. 05)。3)与对照组比较，10 － 8、10 － 7和10 － 6 mol /L 15-KETE 明显增强p-EＲK1 /2(P ＜ 0. 05)，随15-KETE 浓度增大，p-EＲK1 /2 增多。4)与15-KETE 作 用比较，EＲK1 /2 抑制剂PD98059 20 μmol /L、50 μmol /L 和U0126 0. 1 μmol /L、1 μmol /L 均能抑制15-KETE 对 EＲK1 /2 的活化(P ＜ 0. 05)，并且随着抑制剂浓度增大，抑制作用加强。结论15-KETE 对大鼠肺动脉血管平滑肌 细胞上的EＲK1 /2 表达没有明显的影响，但能激活肺动脉血管平滑肌细胞EＲK1 /2，使其磷酸化，并呈时间－ 剂量 依赖关系。EＲK1 /2 通路的特异性抑制剂PD98059、U0126 能抑制15-KETE 对EＲK1 /2 的磷酸化。

关键词: 15-KETE, 细胞外信号调节激酶, 肺动脉血管平滑肌细胞