实验动物科学

兰干球;黄雄军;郭亚芬;李芳芳;王爱德;蒋和生;

2007, 24(06): 1-5.

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目的通过克隆广西巴马小型猪活化素(activin)βA/βB基因cDNA,分析其序列,为研究活化素的生物学功能打下基础。方法提取广西巴马小型猪发情母猪的卵巢总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在AMV酶作用下合成cDNA;用LA-Taq进行PCR扩增出包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列,把两个序列分别连接到PMD-18载体进行克隆和序列分析。结果包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列长度分别为964 bp和791 bp,两个亚基的序列比较保守,与GenBank上发表的猪activin两个亚基同源性达到99.79%和99.62%。activinβA基因有两个碱基发生突变,其中一个在成熟肽序列上,一个在非编码序列上;βB基因信号肽序列上有三个碱基发生突变,其中一个是同义突变。

广西巴马小型猪促生长激素释放激素成熟肽的克隆及序列分析

郭亚芬;李芳芳;兰干球;黄雄军;王爱德;秦小娥;

2007, 24(06): 6-10.

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目的扩增广西巴马小型猪促生长激素释放激素(GHRH),分析其序列结构特点。方法以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,用特异性引物扩增GHRH外显子3,再用引物延伸悬挂PCR法扩增GHRH成熟肽,纯化后,连接、转化到大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序。结果经测序证实广西巴马小型猪GHRH外显子3及其成熟肽的基因序列与相关文献报道一致。克隆得到的广西巴马小型猪GHRH序列全长为132 bp,其中外显子3基因序列长105bp。同源性比较发现,广西巴马小型猪GHRH外显子3基因序列与GenBank(NCBI)中报到的猪GHRH外显子3相比,同源性为97.14%,有3处发生碱基变化。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列。

广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA的克隆及序列分析

郭亚芬;罗琴;王世凯;兰干球;王爱德;

2007, 24(06): 11-14.

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目的扩增广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA序列,分析其序列结构特点,为进一步从分子水平上对广西巴马小型猪的生长发育提供理论依据,也为日后构建原核表达载体、研究Ghrelin基因的生物功能奠定基础。方法以广西巴马小型猪胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增Ghrelin的cDNA,纯化连接pMD18-T载体后转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序。结果经测序证实克隆得到的广西巴马小型猪Ghrelin cDNA序列全长为357 bp,与相关文献报道一致。同源性比较发现,广西巴马小型猪Ghrelin cDNA基因序列与GenBank报道的猪相应序列同源性为99.7%,只有一处发生碱基突变。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪Ghrelin cDNA。

广西巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA克隆和序列分析

王世凯;兰干球;罗琴;郭亚芬;王爱德;

2007, 24(06): 15-19.

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目的通过RT-PCR扩增广西巴马小型猪Myostatin cDNA序列,经过连接、转化、克隆测序后,与NCBI中发表的猪Myostatin序列进行同源性比较,分析广西巴马小型猪Myostatin的cDNA序列结构特点及与其他物种间的聚类关系,为日后构建Myostatin高效表达载体及进一步研究Myostatin对广西巴马小型猪肌肉生长的影响奠定基础。方法以广西巴马小型猪的肌肉组织总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),利用合成的特异性引物,扩增得到巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA的全序列。该扩增片段经纯化后,连接到pMD18-T载体上扩增,经一系列鉴定后,测序。结果本实验克隆到巴马小型猪Myostatin基因cDNA序列长度为1128 bp,与GenBank报道的猪Myostatin基因cDNA序列同源性高达99.7%,与人、奶牛、家鼠等物种的cDNA序列间同源性可达到92.3%以上,证明Myostatin基因具有较高的保守性。同时发现广西巴马小型Myostatin基因cDNA序列有三处存在碱基突变,两个为同义突变,一个为错义突变。

广西巴马小型猪生长激素(pGH)基因全序列克隆及序列分析

杨秀荣;兰干球;郭亚芬;王爱德;

2007, 24(06): 20-25.

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目的克隆广西巴马小型猪生长激素(pGH)基因全序列,并与已发表的其它品种猪的生长激素(pGH)基因全序列进行比较,探讨该基因在广西巴马小型猪中可能存在的变异。方法以广西大学巴马小型猪基因组DNA为模板,扩增巴马小型猪生长激素基因的全序列,将该扩增片段亚克隆到pMD18-T载体后测序。再将测序结果在NCBI进行BLAST。结果测序结果证明克隆得到了巴马小型猪GH基因,全长为2 007 bp。同源性比较发现,巴马小型猪GH基因全序列与GenBank中发表的五指山猪、太湖猪及普通猪的GH基因全序列的同源性分别为99.4%、98.3%、93.9%。

广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)克隆及原核表达

郭亚芬;兰干球;莫毅;梁方方;杨秀荣;蒋钦杨;蒋和生;王爱德;

2007, 24(06): 26-29.

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目的通过RT-PCR扩增获得广西巴马小型猪Follistatin的cDNA全序列,经克隆测序分析其cDNA序列结构,进而构建pET-Fo原核表达质粒,使用IPTG诱导表达获得其融合蛋白,为将来进一步研究Follistatin对广西巴马小型猪肌肉生长和繁殖性能的影响奠定基础。方法从广西大学巴马小型猪卵巢中提取总RNA,并以其为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),在合成的特异性引物引导下,扩增获得广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)cDNA的全序列,长度为1 035 bp。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析。结果广西巴马小型猪卵泡抑素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%。同时,将目的基因插入到原核表达载体pET 32a+多克隆位点中,构建了Follistatin的原核表达载体,并转化于大肠杆菌BL21。转化菌经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析。结论实验已成功地表达了Follistatin的融合蛋白(约58.4 ku)。

广西巴马小型猪雄性初情期和精液性状的分析

卢晟盛;罗龙兴;兰宗宝;黎宗强;郭亚芬;兰干球;王爱德;

2007, 24(06): 30-32.

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目的探讨广西巴马小型猪雄性初情期和精液品质性状。方法将15、20、25、26、27、28、29、30、45、55、62、75日龄巴马小型猪睾丸制作成切片,检查其曲细精管中是否已经产生精子;采集巴马小型猪精液,检测其物理性状和化学成分。结果初步判断雄性巴马小型猪的初情期为45日龄左右。巴马小型猪精液的主要物理性状:射精量107.5 mL±39.0 mL、酸碱度7.6±0.3、精子密度0.732亿/mL、精子活率0.754±0.079、精子活力0.376±0.168、精子畸形率0.256±0.159。主要化学成分:Na+1.56 mg±0.13 mg/mL、K+0.78 mg±0.06 mg/mL、Cl-1.62 mg±0.18 mg/mL、磷脂8.7 mg±0.2 mg/100 mL、果糖117.4 mg±81.0 mg/100 mL、柠檬酸45.6 mg±77.6 mg/100 mL。

广西巴马小型猪不同年龄生殖激素水平的分析

卢晟盛;罗龙兴;郭亚芬;兰干球;王爱德;

2007, 24(06): 33-35.

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目的探讨广西巴马小型猪不同年龄生殖激素水平。方法利用ELISA酶免疫试剂盒和多功能标记免疫测定系统,对不同年龄的雌雄巴马小型猪血清生殖激素浓度进行测定。结果雄性巴马小型猪血清TESTO、FSH浓度从2月龄到6月龄呈上升趋势,在6月龄时达到最大值(分别为12.2 ng±8.9 ng/mL和64.6 ng±6.1 ng/mL),6月龄后浓度呈下降趋势;血清LH浓度从2月龄到4月龄呈上升趋势,在4月龄时达到最大值(46.8 ng±12.5 ng/mL),4月龄后呈下降趋势。雌性巴马小型猪从2月龄到4月龄,血清FSH、LH、E2浓度都呈现出显著升高趋势,到4月龄时达到最大值(分别为51.9 ng±54.0 ng/mL,23.2 ng±31.6 ng/mL,79.3 pg±93.0 pg/mL),4月龄后又都呈现较明显下降趋势。

广西巴马小型猪生长期日粮蛋白与能量水平需要的测定

兰干球;郭亚芬;王爱德;

2007, 24(06): 36-38.

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目的本试验对生长期(45~117日龄)的广西巴马小型猪进行了生长饲养实验。方法试验一:选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪,按平均体重随机分为四组(10头/组)。在45~80日龄,四个组分别喂以含蛋白质水平为13%、14%、16%、18%的日粮;在81~117日龄,仍以上面的40头广西巴马小型猪为实验材料,分别喂以含蛋白质水平为11%、12%、13%、14%的日粮。试验二:选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪,按平均体重随机分为四组(10头/组)。分别喂以日粮1(CP15%、DE12.95 MJ/kg),日粮2(CP15%、DE13.37 MJ/kg),日粮3(CP13%、DE12.95MJ/kg)和日粮4(CP13%、DE13.37MJ/kg)。结果在45~80日龄,上述不同蛋白质含量的日粮对广西巴马小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05);在81~117日龄,蛋白水平为12%、13%、14%的日粮对小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05),但蛋白质水平为11%的日粮组总增重显著低于前面三组(P<0.05)。试验二的结果表明,4种不同能量与蛋白组合的日粮对生长期(45~75日龄)小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05)。结论本实验结果表明广西巴马小型猪生长期(45~117日龄)日粮营养需要水平为粗蛋白12%~13%,消化能12.95 MJ/kg。日喂料量为体重的2.0%~2.25%即可维持广西巴马小型猪的生长期(45~117日龄)较缓慢的生长速度。

五指山小型猪动脉粥样硬化模型的建立

陈华;谢忠忱;黄广勇;刘亚千;李春海;郭雄明;辛宁波;

2007, 24(06): 39-43.

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目的建立五指山小型猪动脉粥样硬化模型,探讨小型猪动脉粥样硬化模型复制规范。方法3~4月龄五指山小型猪30头,随机分为3组:对照组6头,喂基础饲料;实验组分别饲喂含1.5%胆固醇的高脂饲料(T1组)和含3.0%胆固醇的高脂饲料(T2组)。实验过程中进行一般临床观察和血脂相关指标检查,在实验后4、6、8和12个月,实验组分别处死动物3头,对照组分别在实验后6个月和12个月各处死3头,对动物的心血管系统和主要脏器做病理学检查。结果高胆固醇、高脂饲料能够引起五指山小型猪血清胆固醇指标升高和动脉粥样硬化病变形成。实验组血清LDL-C、TC和HDL-C值在实验后1个月显著升高,升高幅度最高分别达到对照组的13.3~15.0倍、8.2~10.2倍和3.3~4.2倍。在实验后4个月,实验组动物均出现明显的早期动脉粥样硬化病变,至6个月和8个月,动脉病变逐渐加重,最严重的病变可达病理分级的Ⅳ级。至实验后12个月,在动物的大、中动脉观察到广泛的病变,最严重部位达到病理分级的Ⅴ级。动脉病变易发且严重的部位为腹主动脉、髂动脉和冠状动脉,动脉病变少见且较轻的部位为颈总动脉、肠系膜总动脉和肾动脉。血脂相关指标的升高幅度、动脉病变的出现时间和严重程度T2组比T1组略重,但是差异不十分显著。结论小型猪食饵性动脉粥样硬化模型的诱导配方中,胆固醇含量以1.5%~2.0%为宜,观察早期动脉病变诱导时间需要4至8个月,晚期病变则需要12个月以上的诱导时间。

五指山小型猪动脉粥样硬化模型的病理学研究

陈华;李春海;谢忠忱;刘亚千;郭雄明;

2007, 24(06): 44-48.

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目的观察小型猪动脉粥样硬化模型动脉病变的形态特点、分布规律和发展过程,为小型猪动脉粥样硬化模型的应用提供基础资料。方法3~4月龄五指山小型猪30头,随机分为3组,对照组6头,喂基础饲料,实验组分别饲喂含1.5%胆固醇的高脂饲料(T1组,12头)和含3.0%胆固醇的高脂饲料(T2组,12头),在实验后4、6、8和12个月,T1和T2组分别处死动物3头,对照组分别在实验后6个月和12个月各处死3头,对动物的心血管系统和主要脏器做病理学检查。结果实验后4个月,实验组动物均出现明显的早期动脉粥样硬化病变,至6个月和8个月,动脉病变逐渐加重,在实验后12个月,于动物的大、中血管观察到广泛的动脉病变。动脉病变易发且严重的部位为腹主动脉、髂动脉和冠状动脉,动脉病变少见且较轻的部位为颈总动脉、肠系膜总动脉和肾动脉。动脉病变大体分为3种类型,分别为以胸主动脉为代表的脂纹性病变,以腹主动脉为代表的纤维斑块病变和以冠状动脉为代表的中小动脉病变。动脉病变的发展过程在不同血管和不同部位也有差别,动脉病变的出现时间和严重程度动物个体之间差别较大,T1组和T2组差别不十分显著,以T2组略重。结论小型猪动脉粥样硬化病变与人类十分相似,但是不同部位的血管病变类型和发展过程有所不同,应根据实验需要选择观察血管和实验周期。

三个品系小型猪Ⅱ型糖尿病模型的比较研究

陈华;刘亚千;李春海;郭雄明;黄丽洁;

2007, 24(06): 49-55.

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目的比较三个品系小型猪对高糖高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病模型的敏感性,为我国小型猪在Ⅱ型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法4~5月龄巴马小型猪、五指山小型猪和中国农大小型猪各6头,以4头中国农大小型猪为对照,同步开展高糖高脂饲料喂养试验,试验周期8个月。每月称1次体重,测定血糖、血清胰岛素含量,每2个月进行1次静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),测定脂质代谢相关指标。结果巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料比较敏感,在饲喂5~6个月后,开始出现糖代谢异常,表现为显著肥胖、血清胰岛素升高和胰岛素敏感性下降。至实验后8个月,巴马小型猪和五指山小型猪各有1头发展为糖尿病,分别有3头和2头出现糖尿病前期症状。中国农大小型猪对高糖高脂饲料诱发糖尿病相对不敏感,实验期间空腹血糖水平、血清胰岛素含量、胰岛素敏感指数和IVGTT一直无显著变化,仅在实验后7个月开始表现肥胖,8个月出现胰岛素敏感性减低。三个品系小型猪在高糖高脂饲喂后,血脂相关指标(TG,CHO,HDL-C,LDL-C)普遍升高,以巴马小型猪升高幅度最大。结论巴马小型猪和五指山小型猪对高糖、高脂饲料诱发Ⅱ型糖尿病比较敏感,品系内个体差异较大。中国农大小型猪相对不敏感。这一结果为进一步的Ⅱ型糖尿病相关基因分析和高敏感家系培育研究提供了基础资料。

实验用小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞为核供体生产转基因克隆胚胎

潘登科;潘求真;牟玉莲;万荣;刘吉;郑茂恩;刘晓;张莉;冯书堂;

2007, 24(06): 56-59.

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目的比较不同类型体细胞对生产转基因克隆胚胎效率的影响。方法利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染到五指山小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞,经过G418筛选后均获得了阳性细胞株。然后分别以两种类型转基因细胞以及未转基因细胞为核供体进行体细胞核移植,比较不同类型供体细胞克隆胚胎的囊胚发育率。结果胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞克隆胚的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,8.3%vs.7.1%);转基因胎儿成纤维细胞(9.6%)和转基因骨髓间充质细胞(9.9%)克隆胚胎的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,9.6%vs.9.9%);每一种类型供体细胞转基因与否对克隆胚的囊胚发育率无影响(P>0.05)。结论通过体细胞核移植技术,小型猪骨髓间充质细胞与胎儿成纤维细胞均可有效地生产转基因囊胚。

近交培育五指山小型猪GHR基因的克隆及其真核表达载体的构建

李吉涛;牟玉莲;张莉;杨述林;李奎;冯书堂;

2007, 24(06): 60-63.

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目的探讨近交培育五指山猪矮小的分子机理,为五指山猪实验动物化奠定基础。方法近交系五指山猪肝脏组织提取总RNA,然后RT-PCR成功扩增出GHR基因,克隆入pGEM-Teasy载体进行测序,并与正常猪GHR基因序列进行比对;然后经SalⅠ和XbaⅠ双酶切回收后与同样经过双酶切回收的pEGFP-C1真核表达载体连接,构建五指山猪GHR基因真核表达载体。结果测序结果表明:五指山猪GHR基因编码区包括639个氨基酸;经过酶切和测序验证五指山猪GHR基因真核表达载体构建成功。结论经序列比对后发现GHR信号肽编码区发生两处氨基酸替换,可能会影响到生长激素的胞内运输;生长激素受体胞内域编码区发生多处突变,并且导致相应氨基酸发生替换,可能会影响生长激素受体的下游信号转导。五指山猪GHR基因真核表达载体的成功构建为进一步研究GHR的功能和下游信号转导奠定了基础。

猪胚胎干细胞(EG)嵌合体鉴定研究

牟玉莲;冯书堂;刘立新;董晓;陈宏平;况玲;张青峰;张勇;

2007, 24(06): 64-65.

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应用微卫星技术,检测验证经显微注射胚胎干细胞(EG)而获得的嵌合体猪,在其各种组织中的外源基因的嵌合情况。结果表明:本研究中所获得嵌合体猪的皮肤、大脑、胰、甲状腺、血有外源基因嵌合,而其肺、肝、脾、肾、空肠、卵巢这些组织并没有嵌合。

自然分娩人工饲养获得净化小型猪尝试

单同领;靳二辉;杨述林;崔立;田克恭;冯书堂;

2007, 24(06): 66-68.

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目的探讨自然分娩人工饲养能否获得净化的五指山小型猪。方法母猪自然分娩后2 h内,将仔猪处理后转到隔离器,用奶粉、米粉、饲料分别过渡人工饲养。其间分别接种7次益生菌、补充铁硒制剂两次。饲养至42 d,测定其携带病原抗体。结果仔猪成活率为75%,原猪场所具有的病原均被隔离,达到净化试验目的。结论自然分娩人工饲养能获得无多种人畜共患疾病的净化五指山小型猪。

实验用五指山小型猪正常生理值测定

靳洪涛;凡春荣;李慧;李晋;李吉涛;王学锋;冯书堂;王爱平;

2007, 24(06): 69-73.

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目的建立中国实验用五指山小型猪正常生理参考值。方法选用24头中国实验用五指山小型猪,雌雄各半,对其体重、体温2、0项血液学指标2、1项血清生化指标、4项心电图指标、尿常规、主要脏器重量和脏器系数进行了测定,并选用同一批动物对其血液学、血清生化、心电图等生理指标进行了为期4个月的连续测定。结果五指山小型猪部分指标如血液学的WBC、LYM%、GRAN%、PCT,血清生化指标如ALP、P、Na、Cl雌雄动物相差显著,其他指标较一致。心电图指标、体重、主要脏器系数雌雄较一致,部分生化指标如GGT等与临床人正常值较接近。动态测定结果提示各项主要指标测定结果较稳定,随着饲养时间的延长,少数血液生化指标如WBC、GOT有一定的改变,但幅度较小。结论初步建立了中国实验用五指山小型猪正常生理参考值,这些生理数据的采集为其进一步开发和应用提供了有益的参考。

贵州小型猪复合因素所致肝纤维化模型的建立

赵菊花;吴曙光;巫全胜;郭科男;董小君;魏剑林;钱宁;

2007, 24(06): 74-77.

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建立贵州小型猪复合因素所致的肝纤维化模型,为肝纤维化机制和治疗研究提供基础。方法贵州小型猪16头,雌雄各半,随机分为对照组和实验组。对照组每周两次给予溶剂橄榄油和生理盐水,实验组每周两次分别腹腔注射给予40%的四氯化碳(CCl4)橄榄油和兔血清各0.5 mL/kg,共9周,建立复合因素所致的肝纤维化模型。实验结束时,取血清查肝功ALT、AST、TP、ALB、A/G,取肝组织邻片做常规HE染色、Masson染色和Van Gieson染色,光镜和电镜下观察病理变化。结果染毒9周后,实验组血清ALT、AST比对照组明显增高(t值分别为0.0001、0.0004,P<0.01),ALB、A/G比对照组明显降低(t值分别为0.001、0.003,P<0.01);实验组肝组织光镜和电镜下观察病理切片均较对照组有明显的改变。结论复合因素CCl4、兔血清腹腔注射可导致贵州小型猪肝纤维化。

贵州小型猪心肌细胞超微结构的观察

钱宁;吴曙光;邓宏;张毓芹;

2007, 24(06): 78-80.

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观察贵州小型猪心肌细胞的形态和结构。方法应用透射电镜进行观察。结果贵州小型猪心肌细胞的肌丝有规律排列形成的周期性横纹明显可见,可分辨出Z线I、带、A带、H带和M线;在肌丝周围有丰富的线粒体;肌浆网不丰富,横小管十分细小,未见二联体;在Z线处,可见心肌细胞之间含有3种连接方式的特有连接结构——润盘。结论贵州小型猪心肌细胞的超微结构与人类极为相似,但也有其自身的特点。

护肾Ⅰ号对顺铂致肾损伤预防作用的实验研究

董小君;郭科男;吴曙光;李术钗;张毓芹;邓宏;钱宁;

2007, 24(06): 81-83.

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目的研究护肾Ⅰ号对顺铂所致贵州小型猪急性肾损伤的预防作用。方法将贵州小型猪随机分为正常对照组、顺铂模型组、中药预防组。每天给中药预防组小型猪灌服护肾Ⅰ号煎剂,连续灌胃5 d,以4 mg/kg顺铂一次性腹腔注射,膀胱插管收集尿液,动态观察给顺铂前后第0、1、3、6、24、489、6 h时段小型猪的尿量,测尿中肌酐及尿素氮浓度,计算各时段肌酐和尿素氮的排出量。结果与正常对照组比较,顺铂模型组尿量和肌酐、尿素氮的排出量显著减少,中药预防组的各项指标得到明显改善。结论护肾Ⅰ号可预防顺铂所致的肾损伤。

贵州小型猪牙槽嵴裂动物模型的建立

田锟;佘小明;钱宁;吴曙光;张倩;金鑫;

2007, 24(06): 84-85.

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目的采用外科手术方法建立贵州小型猪牙槽嵴裂动物模型,为牙槽嵴裂的相关治疗提供实验基础。方法贵州小型猪20只。设计唇腭侧两个"L"型黏骨膜瓣,去除自第一乳侧切牙近中至乳尖牙近中约8 mm×9 mm骨质;将唇腭侧黏膜覆盖骨创面严密缝合。术后通过大体观察、X线、组织学检查评价实验结果。结果术后观察10周,所有实验动物所形成的牙槽嵴裂裂隙保持良好,无自愈;软组织愈合良好。结论利用贵州小型猪建立的人工牙槽嵴裂动物模型方法可靠,稳定性好。

贵州小型猪病原生物携带和感染状况的调查

田维毅;钱宁;王平;蔡琨;王文佳;吴曙光;

2007, 24(06): 86-88.

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目的检测贵州小型猪病原生物携带和感染状况,为进行微生物与寄生虫控制提供依据。方法采集贵州小型猪封闭群皮毛、分泌物、血液及粪便等标本,采用形态观察、生化反应和血清学方法检测不同部位共36种微生物与寄生虫指标。结果在36种检测指标中,该种群对28种病原生物有不同程度的携带和感染。结论贵州小型猪的病原携带和感染现状是对其进行微生物与寄生虫监测和控制的主要依据。

猪圆环病毒2型ORF2基因及片段的原核表达

屈素洁;黄伟坚;冯建远;朱芸;陈琼;谢丽华;

2007, 24(06): 89-92.

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目的表达猪圆环病毒2型ORF2抗原,为研制猪圆环病毒2型血清学诊断方法以及生物制品生物安全性检验,提供技术支持。方法根据猪圆环病毒2型(PCV2)LC株序列,设计合成5对引物,采用PCR方法从全序列重组质粒PCV2-LC中扩增出了ORF2基因和4个不同ORF2基因片段,分别将其克隆到原核表达载体PET-32a上,再分别将各个重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中,用终浓度1 mmol/LIPTG诱导。结果表达产物以包涵体的形式存在,经Western-blot检测表明,表达的重组蛋白ORF2b、ORF2c、ORF2d能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。表达的重组蛋白为ELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。

288株猪圆环病毒的序列比较及遗传进化分析

尹业师;黄伟坚;陈琼;刘海鹏;谢丽华;冯建远;王爱德;

2007, 24(06): 93-99.

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目的为进一步了解猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)的遗传进化规律,为该病的预防和控制奠定基础。方法对来自世界各国的26株PCV1和262株PCV2的全序列用生物软件进行了核苷酸的同源性比较,并对其ORF1和ORF2进行了核苷酸和推导氨基酸的比较。结果从核苷酸水平来看,PCV1与PCV2明显分为两支,PCV1间分布没有规律,而PCV2间又分为以来自美国、加拿大、澳大利亚的序列为代表的亚型Ⅰ和以来自法国和新西兰的序列为代表的亚型Ⅱ;但从氨基酸水平来看,其分型并没有规律可循。从遗传进化树可以看出,PCV2的分布并没有地域性和时限性。数据统计显示,尽管相隔近十年之久,但其同源性并没有发生太大的改变,可见PCV2相当保守。另外对PCV2的碱基和氨基酸突变位点进行统计发现,PCV2序列间更倾向于碱基的颠换,但并无单个碱基和氨基酸的偏好性。结论PCV2相对保守,地域性和时限性分布不明显。

云南省实验动物管理条例

2007, 24(06): 100-103.

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实验用小型猪在比较医学中的研究应用与发展

靳二辉;杨述林;冯书堂;彭克美;李奎;

2007, 24(06): 104-106.

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小型猪生长激素基因研究进展

郑茂恩;潘登科;马月辉;叶绍辉;冯书堂;

2007, 24(06): 107-110.

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我国小型猪资源实验化培育及开发利用

冯书堂;

2007, 24(06): 111-118.

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实验用小型猪胚胎移植技术研究进展

戴琦;孙世铎;冯书堂;

2007, 24(06): 119-122.

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电融合仪BLS在猪卵母细胞孤雌激活中的应用

刘晓;张庆桥;潘登科;陈扣扣;张卫红;冯冲;冯书堂;

2007, 24(06): 123-125.

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目的建立并优化BLS细胞融合仪在猪孤雌胚体外生产中的使用条件,同时为克隆胚的生产提供数据参考。方法以体外成熟的猪卵母细胞为研究对象,研究了不同的电场强度、脉冲时程和脉冲次数对猪卵母细胞电激活效果及其对孤雌胚发育率的影响。结果电激参数(1.2 kV/cm、100μs、2次脉冲)能够得到较高的卵裂率和囊胚率(70%、30%左右);BLS细胞融合仪是一种经济高效的胚胎激活仪。

小型猪超数排卵与胚胎回收方法的研究

戴琦;刘岚;牟玉莲;孙世铎;冯书堂;

2007, 24(06): 126-128.

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目的本试验对小型猪进行超数排卵和早期胚胎回收技术进行试验研究。研究结果如下:PG+PMSG+HCG法对断奶母猪的同期发情率达100%,优于其对非哺乳期空怀母猪的72.73%的同期发情率,但二者平均排卵数显著性差异(P<0.05);屠宰冲胚和手术法冲胚,胚胎回收率分别为84.29%和76.92%,回收率差异显著(P<0.05),但头均回收胚数无显著性差异(P>0.05)。

《实验动物科学》2007年第24卷总目次

2007, 24(06): 131-139.

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