实验动物科学 ›› 2021, Vol. 38 ›› Issue (2): 8-.
摘要：
摘要:目的 研究干扰长链非编码 RNA 核富集的转录物 1( NEAT1) 上调 miR-126 抑制胃癌细胞的生长,间质转换及裸鼠肿瘤形成的影响。 方法 通过 RT-PCR 分析 NEAT1 在胃癌 MGC-803、SGC-7901 细胞和正常胃上皮 GES-1细胞中的表达,并检测 sh-NEAT1 的沉默效率。 NEAT1 沉默后,EDU 染色分析肿瘤细胞的增殖能力;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell 小室和划痕实验分析肿瘤细胞的侵袭、迁移能力;Western blot 分析肿瘤细胞 Ki67、Caspase-3、N-cadherin 和 E-cadherin 的表达。 荧光素酶报告实验验证 NEAT1 与 miR-126 的靶向关系,分析 NEAT1 / miR-126 对胃癌 SGC-7901 细胞生长和运动的调节影响;通过构建转染 sh-NEAT1 的 SGC-7901 细胞的移植瘤模型裸鼠,检测30 d 内肿瘤体积及质量变化;免疫组化检测 Ki67 和 Caspase-3 的表达,RT-PCR 检测 NEAT1 和 miR-126 的表达;Western blot 检测 N-钙黏蛋白( N-cadherin) 及 E-钙黏蛋白( E-cadherin) 的表达。 结果 NEAT1 在肿瘤细胞中的表达水平显著高于正常细胞( P< 0. 05) ,sh-NEAT1 沉默后,肿瘤细胞 NEAT1 的表达量显著降低,增殖能力明显受到抑制,凋亡细胞比例显著增高,肿瘤细胞的侵袭、迁移能力明显减弱,肿瘤细胞中 Ki67 和 N-cadherin 表达量明显降低,Caspase-3 和 E-cadherin 的表达水平显著升高,差异均具有统计学意义( P< 0. 05) 。 荧光素酶报告实验表明NEAT1 与 miR-126 存在靶向关系,sh-NEAT1 能显著促进 miR-126 的表达( P< 0. 05) ,miR-126 inhibitor 能显著促进 sh-NEAT1 对 SGC-7901 细胞增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡。 移植瘤模型裸鼠表明 sh-NEAT1 能够抑制肿瘤体积增大,下调肿瘤组织中 NEAT1、Ki67 及 N-cadherin 的表达水平,上调 miR-126、Caspase-3 和 E-cadherin 的表达量,肿瘤的 质 量 与 对 照 组 相 比 显 著 增 加,差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 05) 。 结 论 干 扰 长 链 非 编 码 RNANEAT1 能够上调 miR-126 表达,从而抑制胃癌细胞的增殖,并通过阻断 EMT 机制降低肿瘤细胞的侵袭、转移能力,抑制裸鼠肿瘤的形成。
