实验动物科学 ›› 2011, Vol. 28 ›› Issue (02): 1-05.
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摘要: 目的采用大肠杆菌B-半乳糖酶基因LaeZ作为报告基因。建立Tyr03、Axl受体酪氨酸激酶含有loxp位点的 转基因小鼠。与不同组织特异性Cre小鼠杂交,获得时空性表达Tyr03、Axl的转基因小鼠,为研究其在各个组织中 的功能奠定基础。方法构建含有Ioxp位点的Tyr03、Axl受体酪氨酸激酶质粒,测序正确后,通过显微注射法将插 入CAG启动子下游的Geo·STOP—msAxl及Geo—STOP—msTyr03基因的转基因载体注射人BDFI供体鼠受精卵,移植 受精卵至ICR受体鼠,待产仔后,通过双引物PCR鉴定F。以及Fn代小鼠的基因型。RT-PCR,X.gal染色观察小鼠 组织中LacZ基因,运用WB(Western Blot)检测转基因小鼠和野生型小鼠体内目的蛋白表达的差异。结果获得了 含有目的基因的转基因阳性小鼠;通过RT-PCR对阳性小鼠证明LacZ基因的存在;对存在LacZ基因的小鼠进行x. gal染色,在Geo-STOP-msTyr03的脑、睾丸、胸腺中观察到蓝色沉淀,在Geo-STOP-msAxl的脑、心、肾中观察到蓝色 沉淀,间接说明目的基因能表达的组织和器官;对双阳性的Geo-STOP.msTyr03、Geo-STOP—msAxl转基因小鼠和野生 型小鼠,WB检验证实Tym3、Axl基因的表达没有差异,说明在加入stop序列之后,Tym3基因确实存在,而且表达 受到抑制。结论成功建立Geo—STOP—msAxI及Geo-STOP-msTyr03酪氨酸受体转基因小鼠。
中图分类号: