实验动物科学 ›› 2024, Vol. 41 ›› Issue (2): 35-40.DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2024.02.006
摘要： 目 的 本 研 究 旨 在 建 立 一 种 实 时 荧 光 定 量 PCR 方 法, 用 于 检 测 猕 猴 三 磷 酸 腺 苷 结 合 盒 转 运 蛋 白 G2 ( adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2, ABCG2) mRNA 的基因转录水平。 方法 使用 NCBI 上 GenBank 数据库猕猴( Macaca mulatta) 的 ABCG2 核 苷 酸 序 列 号 NM _001032919. 1 及 内 参 GAPDH 核 苷 酸 序 列 号 NM_001195426. 1,借助 Primer premier 5. 0 软件设计 PCR 引物。 提取猕猴新鲜肾组 织 的 总 RNA,并 反 转 录 合 成 cDNA。 接着,利用 PCR 引物进行实时荧光定量 PCR 扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析 ABCG2 的 mRNA 相对表达水平。 结果 PCR 产物测序结果显示,扩增的 ABCG2 和 GAPDH 核苷酸序列与 NCBI 上猕猴的序 列同源性分别为 90. 91%和 91. 14%。 ABCG2 和 GAPDH 的扩增效率均达到 80% ~ 120%,实时荧光定量 PCR 标准曲 线的熔解曲线为单峰,R 2 接近 1。 结论 本研究建立的检测猕猴 ABCG2 mRNA 实时荧光定量检测方法,为研究高 尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。
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