当期目录

2023年 第40卷 第4期    刊出日期：2023-08-28

上一期   

论著

蕨麻猪高原多脏器功能障碍综合征模型 eNOS 与 ET-1 的变化研究

付晓燕, 冯小明, 李渊明, 肖攀, 王红义, 陆璐, 张梅, 牛廷献

2023, 40(4):  1-5.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 001

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目的 研究高原多脏器功能障碍综合征( H-MODS) 蕨麻猪模型内皮型一氧化氮合成酶( eNOS) 和内皮素 1(ET-1)在其炎性反应发展过程中的变化特点。 方法 选用低、中、高 3 个剂量( B、C、D 组) 内毒素( LPS) 诱导高原土生蕨麻猪成功建立 H-MODS 模型,0. 9%氯化钠溶液为对照组(A 组) 。 检测不同时点血清 eNOS 及 ET-1 表达水平。 结果 各组蕨麻猪泵入 LPS 后 eNOS 和 ET-1 表达量均急剧升高,并在 3 h 时升至最高,之后快速下降,至 24 h基本恢复到正常值,对照组各时间点表达量无显著性变化。 eNOS 表达量 B、C、D 组在 3 ~ 12 h 与 0 h 和 A 组相比明显升高 (P<0. 01) ;24 ~ 72 h B、C、D 组 eNOS 表达量基本恢复到正常水平,与 0 h 和 A 组相比无明显差异。 ET-1 表达量 B、C、D 组在 3 ~ 6 h 与 0 h 和 A 组相比显著升高 (P<0. 01) ;B、C 组 ET-1 表达量在 12 h 与 0 h 和 A 组相比明显升高 (P<0. 05) ;D 组 ET-1 表达量在 12 h 与 A 组相比明显升高 (P<0. 05) ;24 ~ 72 h B、C、D 组 ET-1 表达量基本恢复到正常值,与 0 h 和 A 组相比无明显差异。 结论 高原多脏器功能障碍综合征( MODS) 形成时机体产生严重的炎性反应,eNOS 及 ET-1 表达量迅速升高,但在免疫调节作用下其表达量迅速出现下调达到平衡状态。


热应激对 ICR 雌性小鼠血液生化指标的影响

田永路, 李夏莹, 韦玉生, 李娜, 曹栋, 朱德生

2023, 40(4):  6-9.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 002

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目的 探讨热应激对小鼠血液生化指标的影响。 方法 实验从 25 ℃ 对照组和 42 ℃ 热应激第 7、14、21、28 天,各选取 4 只小鼠进行血液生化指标的测定。 血液生化指标包括小鼠血清 Na + 、K + 、Cl - 、血清总蛋白( TP) 、血清 白蛋白(ALB) 、丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 ( ALT) 、天 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 ( AST) 、乳 酸 脱 氢 酶 ( LDH) 、血 清 碱 性 磷 酸 酶 (ALP) 。 采用罗氏全自动生化分析仪进行测定。 其中 Na + 、K + 、Cl - 采用离子选择电极法;血清总蛋白采用双缩脲 法;白蛋白采用溴甲酚绿法;ALT、AST、LDH、ALP 采用速率法。 结果 热应激 7、14、21 和 28 d,小鼠血清中的 Na + 浓度较对照组偏高,而 K +浓度均较对照组偏低,但是各组之间不存显著差异。 C1 - 浓度较对照组在第 28 天时显著 增高(P<0. 05) 。 TP 含量在各个时期不存在显著差异,而 ALB 的含量在第 28 天显著高于对照组( P<0. 01) 。 热应 激组 AST、LDH、ALP 浓度在第 21 天时显著高于对照组( P< 0. 05) 。 结论 热应激提高了小鼠血清中 ALT、AST、 LDH、ALP 浓度。 

兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重 PCR 检测方法的建立

张贺, 陶坤盛, 陈见兴, 王豪杰, 陈洪岩, 王玉娥, 夏长友

2023, 40(4):  10-16.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 003

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目的 建 立 兔 源 多 杀 性 巴 氏 杆 菌 ( Pm) 、金 黄 色 葡 萄 球 菌 ( Sa) 和 肺 炎 克 雷 伯 菌 ( Kp) 的 多 重 PCR 方 法。 方法 本研究参考 Pm kmt1 基因、Sa nuc 基因和 Kp kh1 基因的保守区域,设计 3 对特异性引物,以温度梯度 PCR 法 确定最适退火温度( Tm) ,采用控制单一变量法优化引物浓度,构建 kmt1、nuc 和 kh1 基因的重组质粒标准品 pMDPm、pMD-Sa 和 pMD-Kp,确定最小检测量;以兔源支气管败血波氏杆菌和产气荚膜梭菌等 9 种病原体核酸样本确定 多重 PCR 法的特异性;通过批间和批内实验验证其重复性;经检测疑似感染的临床样本与已报道的检测方法进行 比较,评估其临床应用效果。 结果 最适退火温度为 54. 5 ℃ ;扩增 kmt1 和 nuc 基因的引物最适浓度均为 1 μL (10 μmol / L) ,扩增 kh1 基因的引物最适浓度为 0. 5 μL(10 μmol / L) ;pMD-Pm 最低检测限为 20. 6 copies/ μL,pMDSa 最低检测限为 18. 2 copies/ μL,pMD-Kp 最低检测限为 23. 2 copies/ μL,表明其灵敏性高;该方法仅对 Pm、Sa 和 Kp 有特异性扩增条带,对其他病原体均无扩增条带,表明特异性较强;批间和批内检测结果一致,表明重复性较 好;经临床样本检测 Pm、Sa 和 Kp 单独的阳性率分别为 62. 92%、25. 84% 和 49. 43%,与已报道的检测方法结果一 致。 结论 本研究成功建立了一种能够同时快速检测兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的多 重 PCR 方法。 

基于 Nrf2 / HO-1 信号通路研究黛玉膏对肛瘘大鼠血管生成的影响

郭伟, 闫丽霞, 常少青, 刘振丽

2023, 40(4):  17-22.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 004

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目的 观察黛玉膏对肛瘘大鼠血管生成和 Nrf2 / HO-1 信号通路的影响。 方法 将 20 只 SPF 级 SD 大鼠进行 综合法构建肛瘘术后创面模型,建模成功后随机分为模型组和黛玉膏组,每组 10 只。 黛玉膏组大鼠使用药物涂抹 伤口,模型组以 0. 9%氯化钠溶液擦洗。 另选取 10 只仅造成创口的大鼠作为对照组,也以 0. 9% 氯化钠溶液擦洗, 各组大鼠每天处理 2 次,均连续干预 14 d。 观察创面愈合情况及局部血流。 ELISA 法检测肛瘘创面组织血管内皮 生长因子(VEGF) 、VEGF 受体(VEGFR) 、内皮生长因子(EGF) 、血小板衍生生长因子( PDGF) 、白细胞介素 IL-1β、 IL-6、IL-10、大鼠肿瘤坏死因子 α( TNF-α)水平;Western blot 法检测创面组织 Nrf2 及 HO-1 蛋白水平。 结果 与对 照组相比,模型组创面愈合率及血流量显著下降(P<0. 05) ,与模型组相比黛玉膏组大鼠创面愈合率和血流量显著 升高(P<0. 05);CD31 染色结果比较,模型组较对照组显著降低(P<0. 05),黛玉膏组较模型组显著升高(P<0. 05);肉 芽组织 IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α 比较,模型组较对照组显著升高(P<0. 05),黛玉膏组较模型组显著降低(P<0. 05);肉 芽组织 VEGF、VEGFR、EGF、PDGF 比较,模型组较对照组显著降低 ( P < 0. 05),黛玉膏组较模型组显著升高( P < 0. 05);Nrf2、HO-1 蛋白水平比较,模型组较对照组显著降低(P<0. 05),黛玉膏组较模型组显著升高(P<0. 05)。 结论 黛玉膏可以促进肛瘘模型大鼠创面的愈合,促进肉芽组织的血管新生,其机制可能与激活 Nrf2 / HO-1 通路有关。

犬嗅辨人肺癌敏感性和特异性研究

高常青, 陈志恒, 李晶晶, 周晓

2023, 40(4):  23-27.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 005

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目的 证实经过训练的犬嗅辨人类肺癌的敏感性和特异性。 方法 采集 25 例肺癌患者和 127 例对照组志 愿者血液,分离血清后采用双盲实验方法,检测犬嗅辨人类肺癌的敏感性和特异性。 结果 经计算,犬嗅辨肺癌的 敏感性为 100%(95% CI:86. 3% ~ 100. 0%) ,特异性为 99. 2% ( 95% CI:95. 7% ~ 99. 9%) ,阳性预测值( 犬嗅辨为阳 性的临床确诊肺癌患者的比例)为 96. 2%(95%CI:78. 0% ~ 99. 4%) ,阴性预测值(犬嗅辨为阴性的无肺癌参与者的 比例)为 100%,准确率为 99. 3%。 结论 犬嗅辨肺癌的准确率达 99%以上,可作为肺癌早期筛查的辅助工具。 

小鼠细小病毒 VP2 蛋白在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达和免疫原性分析

马畅, 赵迎峰, 陈莉, 刘彪, 赵志刚, 恽时锋

2023, 40(4):  28-33.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 006

摘要 ( )   PDF (3620KB) ( )  

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目的 利用杆状病毒表达系统合成重组小鼠细小病毒(MVM) VP2 蛋白,并对其免疫原性分析。 方法 将优 化后的 MVM VP2 序列克隆至表达载体 pFastBac1,命名为 pFastBac1-MVM VP2,再将其转化至 DH10Bac 感受态大 肠杆菌中形成重组杆粒,提取重组杆粒经 PCR 鉴定正确后转染昆虫细胞 Sf9,镜下观察到细胞明显病变后收获重组 杆状病毒 rBac-MVM VP2。 Sf9 细胞接重组病毒 48 和 72 h 后,用间接免疫荧光 ( IFA) 和蛋白免疫印迹 ( Western blot)法验证重组蛋白的免疫原性。 结果 构建的 rBac-MVM VP2 重组杆状病毒感染 Sf9 细胞后,可成功表达 MVM VP2 重组蛋白,经 Western blot 和 IFA 检测分析,重组蛋白具有较好的免疫原性且在病毒感染 72 h 时表达量较高。 经蛋白纯化后可得到纯度较高的 VP2 重组蛋白。 结论 本研究利用昆虫细胞-杆状病毒系统成功表达 MVM VP2 蛋白并具有良好的免疫原性,为 VP2 相关功能的研究和临床诊断方法的建立奠定基础。 

PD-1 人源化小鼠构建繁殖与基因型鉴定

李晓娟, 孙岩峰, 修叶, 李兴杰, 李瑞生

2023, 40(4):  34-38.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 007

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目的 探讨 PD-1 人源化小鼠的繁育与基因型鉴定,为进一步研究相关小分子抑制剂的体内药效评价提供动 物模型。 方法 通过构建 PD-1 人源化小鼠,获得 F1 代鼠 4 只,雌雄交配进行培育繁殖。 对每窝仔鼠的数量,存活 率等进行记录观察,随后对仔鼠剪尾提取基因组 DNA,用 PCR 法扩增目的基因,然后进行核酸电泳,鉴定基因型。 选用 F2 代纯合型与纯合型雌雄交配,野生型与野生型雌雄交配。 结果 鉴定的 F2 代小鼠有野生型、纯合型和杂 合型 3 种基因型。 纯合型与纯合型交配获得 F3 代仔鼠基因型全部为纯合型。 野生型与野生型交配获得 F3 代仔 鼠基因型全部为野生型。 结论 成功筛选出 PD-1 人源化小鼠纯合子基因型,并有效地进行扩群保种,为今后应用 该小鼠模型提供实验保障。

不同配方高脂饲料诱导建立大鼠高脂血症模型的比较研究

亓妙, 徐晨曦, 吕玲娟, 杨志宏, 杨润梅

2023, 40(4):  39-43.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 008

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目的 应用不同配方的高脂饲料,诱导建立 Sprague-Dawley( SD)大鼠高脂血症模型。 方法 雄性 SD 大鼠随 机分成 6 组:正常对照组和 5 个高脂模型组,连续分别饲喂普通饲料和不同配方高脂饲料 6 周,于诱导 1、2、4 和 6 周检测大鼠血脂含量,诱导 6 周后进行肝脂质含量的检测。 结果 与正常对照组大鼠相比,造模 6 周后,模型 2 和 模型 3 组大鼠血清中总胆固醇( TC)含量显著升高,各模型组大鼠血清中的低密度脂蛋白-胆固醇( LDL-C) 含量均 显著升高;且与正常组大鼠相比,各模型组大鼠肝中的甘油三酯( TG)和总胆固醇( TC)含量也显著增加。 结论 通 过饲喂高脂饲料 6 周进行诱导,添加了 20%果糖和 10%猪油的配方 2 和配方 3 高脂饲料能够成功建立大鼠高胆固 醇血症模型,为降脂药物的研发提供了一种简单、低成本、稳定的动物模型。

自发性先天性白内障大鼠遗传状况分析

尤金炜, 梁磊, 张旭亮, 吴正林, 董敏, 田小芸

2023, 40(4):  44-48.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 009

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目的 了解自发性先天性白内障( TSC) 大鼠的遗传状况,评价遗传质量分析方法。 方法 对 TSC 大鼠、BN 大鼠、F344 大鼠下颌骨 11 项变量进行测量,使用 SPSS18. 0 统计软件进行数据分析;选取近交系大鼠常用的 6 个微 卫星位点,通过 PCR 扩增和琼脂糖电泳鉴定,进行遗传质量检测。 结果 TSC 大鼠与 BN 大鼠相比较,下颌骨参数 有 9 个差异有统计学意义 ( P< 0. 01) ;TSC 大鼠与 F344 大鼠相比较,下颌骨参数有 5 个差异有统计学意义 ( P< 0. 01) 。 TSC 大鼠不同个体在 6 个微卫星位点上的扩增产物均只出现一个条带,4 个位点可以将 TSC 大鼠与 BN 大 鼠区别,4 个位点可以将 TSC 大鼠与 F344 大鼠区别,1 个位点可以将 3 种近交系大鼠区分。 结论 TSC 大鼠下颌骨 变量与 BN 大鼠和 F344 大鼠有明显的差异;TSC 大鼠符合近交系要求,包含 6 个微卫星位点组合,可用于 TSC 大鼠 与常用近交系大鼠品系 BN 和 F344 的遗传背景监测。 

从腹泻实验兔分离的一株大肠埃希菌的生物学特性研究

董浩, 刘志国, 李楠, 邢进, 许中衎, 邢壮壮, 冯育芳, 马丽颖

2023, 40(4):  49-54.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 010

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目的 研究从腹泻实验兔分离到的大肠埃希菌的生物学特性。 方法 对一株从因腹泻而死亡的 SPF 级实验 兔体内分离的致病性大肠埃希菌的遗传谱系、抗生素敏感性、消毒液敏感性以及细菌携带的耐药基因和毒力基因进行较为全面的研究。 结果 该大肠埃希菌属于 B1 型遗传谱系,携带毒力基因 eaeA,属于肠致病性大肠埃希菌。 对常用的 5 种消毒液敏感,对于青霉素、氨苄西林、头孢氨苄、头孢拉定、四环素、多西环素、米诺霉素、红霉素、麦迪 霉素、万古霉素、复方新诺明等 11 种抗生素耐药,携带 aadA1,gyrA,sul1 和 tetA 等 4 个抗生素耐药基因。 结论 从 因腹泻而死亡的 SPF 级实验兔体内分离的致病性大肠埃希菌为一株 B1 型遗传谱系的肠致病性大肠埃希菌,具有 多重耐药性,对常用的消毒剂均敏感。

扩张型心肌病动物模型的建立与评估

张冬, 朱瑾彦, 张敏, 李彬

2023, 40(4):  55-61.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 011

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目的 探索建立扩张型心肌病(DCM)动物实验模型的方法并对其进行评估,为 DCM 的临床诊断治疗提供思 路与方法。 方法 实验选择成年比格犬,分为两组,实验组注射阿霉素,对照组注射等量 0. 9% 氯化钠溶液。 经麻 醉诱导进行冠状动脉造影后,经左侧冠状动脉主干注射阿霉素(多柔比星) ,每周注射一次,连续注射 5 周。 建立实 验组 6 只,对照组 4 只,末次注射 4 周后对各组动物进行心脏超声检测、多导生理记录仪及心导管技术检测、血液学 检测及心室重构评价检测,以评估 DCM 建模的可行性及有效性。 结果 与对照组相比,DCM 组实验动物心脏出现 明显扩大,且心室收缩力出现明显降低;DCM 组实验动物与对照组相比,各项血液学指标( 除白细胞计数外) 均出 现明显差异;与对照组相比,DCM 组实验动物出现明显地全心扩大,Collagen I / III 的含量明显升高。 结论 采用冠 脉多次注射阿霉素(多柔比星)的方法建造 DCM 动物模型,具有可行性及有效性,其周期较短、简单易行,并且更接近于人类 DCM 病理生理过程。

技术

实验动物质量保障体系和服务体系建设

张静, 刘苗苗, 唐倩倩, 尹玉涛, 陈桢, 谢忠忱, 常在

2023, 40(4):  62-68.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 012

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随着现代科学的快速发展,多学科与生命学科的交叉成为热门,实验动物作为生命学科发展的重要支撑,得到了更广泛的使用。 而实验动物质量的严格控制对于以实验动物为研究对象的实验结果的可重复性、稳定性、可靠性至关重要,因此建立完善的实验动物质量保障体系对于实验动物质量的控制必不可少,此外专业技术服务也会进一步维护实验动物质量。 清华大学实验动物中心经过十余年的摸索,形成了较为完备的实验动物质量保障体系,并不断完善与之相匹配的专业技术服务,通过对实践经验整理总结,希望为行业内实验动物中心的运行提供参考,立志于为我国实验动物的发展贡献力量。

啮齿类实验动物唐菖蒲伯克霍尔德菌荧光定量 PCR 方法的建立及应用 

申屠芬琴, 刘敏, 王雪妹, 王吉星, 彭刚, 吴石爱, 李艳楠, 周倩, 张巧稚, 韩雪

2023, 40(4):  69-72.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 013

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目的 建立用于检测实验动物小鼠中唐菖蒲伯克霍尔德菌的荧光定量 PCR 方法。 方法 参考团标公布的序 列合成唐菖蒲伯克霍尔德氏菌引物、探针和质粒,建立荧光 PCR 方法,并对方法的线性、灵敏度、重复性和特异性等 性能进行验证。 同时应用建立的荧光 PCR 方法和细菌培养法对 110 份小鼠送检样品进行比对检测。 结果 建立 的唐菖蒲伯克霍尔德菌荧光 PCR 方法,相关系数 R 2 可达 0. 998,线性良好;方法最低可检测至 1×10 2 copies/ 5 μL, 灵敏度高;方法检测培养的唐菖蒲伯克霍尔德菌为阳性,检测金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、产酸克雷伯杆菌、 绿脓杆菌和嗜肺巴斯德杆菌均为阴性,特异性良好。 采集 110 只安乐死小鼠样品,分别进行细菌培养和荧光 PCR 检测,结果均为阴性,2 种方法结果完全符合。 结论 建立的荧光 PCR 方法性能良好,可用于实验动物小鼠唐菖蒲 伯克霍尔德菌的检测。

一款电子标识应用于小鼠的安全性分析

杜凯, 芦鑫琳, 穆玉凤, 卢赐章, 施鑫, 吴德国

2023, 40(4):  73-75.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 014

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目的 对电子标识进行皮肤致敏实验、皮内反应实验及组织病理学检查,了解其安全性。 方法 使用 0. 9% 氯化钠溶液将电子标识湿化,以保鲜膜覆盖后再用纱布覆盖在剃毛的小鼠皮肤上,1、24、48 和 72 h 记录接触部位情况;将电子标识注射到小鼠皮下,注射后 24、48 和 72 h 安乐死小鼠,观察电子标识周围组织出现的红斑和水肿情况,并对组织进行病理学检查。 结果 电子标识对皮肤没有刺激性,皮下注射电子标识后未见周围组织异样,病理学检查未见异常。 结论 测试的电子标识未发现对小鼠的损伤。

综述

胰腺癌生物模型的应用现状与展望

徐冬, 杨飞

2023, 40(4):  76-82.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 015

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胰腺癌恶性程度高、早期诊断困难且易转移,患者就诊时常因病灶局部进展而失去根治性手术时机,虽然在综合治疗效果方面已取得明显提高,但患者生存率依然很低,预后差。 胰腺癌的隐匿发病使研究者无法及时获取早期病灶进行深入研究,因此,构建合适的生物模型,对研究胰腺癌发生发展的分子机制并寻找新的治疗策略至关重要。 目前常用于胰腺癌临床前研究的生物模型包括自发诱导模型、移植瘤模型、类器官模型等,本文对各模型的 应用现状进行综述。

光照对大小鼠繁育性能影响的研究进展

吴宪文, 陈烨, 徐国恒

2023, 40(4):  83-88.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 04. 016

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环境光照对实验动物的性成熟及繁殖性能力有着重要的影响,不同国家和地区对实验动物大小鼠环境光照 的要求有着较大差别,本文讨论了光照周期、光线波长对大小鼠繁殖的影响,对光照相关的其他因素,如光污染、笼 子摆放位置和笼盒颜色等问题进行分析并提出相应解决建议。 提出墙壁及地面灯带设计和移动光源的方法来解 决实验动物设施光源分布不均问题,同时讨论了工作人员相关知识培训的重要性。