CSF-1R 基因敲入小鼠模型的构建

doi:10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 004

实验动物科学 ›› 2022, Vol. 39 ›› Issue (3): 16-21.DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 004

CSF-1R 基因敲入小鼠模型的构建

(中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所,北京 102629)

收稿日期:2020-12-15 出版日期:2022-06-28 发布日期:2022-07-15
通讯作者: 范昌发( 1970—) ,男,博士,研究员,主要从事模式动物研究。 Email:fancf@ nifdc. org. cn。
作者简介:刘甦苏( 1981—) ,女,副主任技师,主要从事模式动物相关工作。 Email:liususu@ nifdc. org. cn。
基金资助:
“重大新药创制”科技重大专项课题:用于抗体成药性评价的人源化嵌合小鼠模型的构建及应用( 2018ZX09101001-004-002)

Construction of Human CSF-1R Gene Knock- in Mouse Model

(National Institutes for Food and Drug Control, Institute of Laboratory Animals Research,Beijing 102696, China)

Received:2020-12-15 Online:2022-06-28 Published:2022-07-15

摘要/Abstract

摘要： 目的利用 CRISPR-Cas9 技术构建 CSF-1R 基因敲入小鼠模型。方法将人 CSF-1R 基因的 3 到 11 外显子 cDNA 的部分序列,加上 TGA 密码子及 WPRE-PolyA 原件,插入到了小鼠 CSF-1R 基因外显子 3 的第 20 位丙氨酸下游。在鉴定获得阳性模型后,进一步通过 RT-qPCR 分析基因的表达特征并进行精子冷冻保种繁殖。结果该基因正确插入设计位点,转录水平显示转入基因能在小鼠模型心脏、肝、脾、肺、肾、脑等脏器中表达,冷冻精子复苏后体外受精的平均受精率达 67. 74% ,平均产仔率 16. 06% ,并经过 PCR 检测得到阳性小鼠。结论成功构建了人源化CSF-1R 基因敲入小鼠模型,为评价肿瘤免疫抗体药效及相关靶向抗肿瘤药物筛选提供了动物模型。

关键词: CRISPR / Cas9 技术, CSF-1R 基因, 人源化小鼠模型, 抗体药物

Abstract: Objective The CSF-1R knock in mouse model was established by CRISPER / Cas9 technology. Method The partial sequences of exons 3 to 11 cDNA of humanized CSF-1R gene, together with TGA codon and WPREPolyA original, were inserted into downstream of the 20th alanine of exon 3 on mouse CSF-1R gene. The gene expression characteristics were further analyzed by RT-qPCR and sperm cryopreservation was carried out for transgene positive mice. Result The result showed that the trans gene expressed in heart, liver, spleen, lung, kidney and brain of CSF-1R gene knock-in mice. The average in vitro fertilization rate of frozen sperm was 67. 74%, and the average birth rate was 16. 06%. Conclusion A humanized CSF-1R gene knock-in mice model was established successfully,which provides a novel tool for evaluating the in vivo efficacy of antibodies and drugs of this target.

Key words: CRISPR-Cas9, CSF-1R gene, humanized mouse model, antibody drugs

中图分类号:

Q95-3

刘甦苏, 吴勇, 谷文达, 曹愿, 翟世杰, 赵皓阳, 范昌发. CSF-1R 基因敲入小鼠模型的构建[J]. 实验动物科学, 2022, 39(3): 16-21.

LIU Susu, WUYong, GU Wenda, CAO Yuan, ZHAI Shijie, ZHAO Haoyang, FAN Changfa. Construction of Human CSF-1R Gene Knock- in Mouse Model[J]. Laboratory Animal Science, 2022, 39(3): 16-21.

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