当期目录

2022年 第39卷 第3期    刊出日期：2022-06-28

上一期   

论著

甘丙肽受体2基因敲除小鼠的饲养繁育及基因型鉴定

马燕华, 何旎, 裴少非, 吕典, 李文君, 樊保敏, 曾广智, 林成源

2022, 39(3):  1-5.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 001

摘要 ( )   PDF (1484KB) ( )  

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目的 饲养和繁育甘丙肽受体 2 基因敲除小鼠,对小鼠基因型进行分析和鉴定,并验证检测方法的适用性。方法 将引进的 GalR2 基因敲除杂合子雄性小鼠和野生型雌性小鼠以 1 ∶ 2 的比例,或杂合子雌性小鼠和野生型雄性小鼠以 2 ∶ 1 的比例进行交配繁殖,获得的 F1 代杂合子小鼠进行同胞交配,获得 F2 代纯合子、杂合子和野生型小鼠。 小鼠为 2 周龄时将其鼠尾剪取 2 ~ 5 mm 以获取组织 DNA,使用 PCR 对目的基因片段进行扩增,并使用琼脂糖凝胶电泳法对基因型结果进行判定。 结果 GalR2 基因敲除小鼠能够稳定繁育,并获得了一批基因敲除小鼠。F1 代杂合子小鼠交配获得了 3 种基因型小鼠:纯合子( GalR2- / - ) ,杂合子( GalR2+ / - ) 及野生型( GalR2+ / + ) ,使用PCR 法鉴定出小鼠的基因型。 结论 使用科学的繁育方式,以及通过 PCR 法进行基因型鉴定可以获得甘丙肽受体 2 基因敲除小鼠。


弓形虫 RH 株感染比格犬动物模型的建立

问婉欣, 陈洪岩, 韩凌霞

2022, 39(3):  6-10.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 002

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目的 建立实验用犬人工感染人源强毒力型弓形虫的发病模型。 方法 将 3 只 76 日龄人工哺乳、正压隔离器内生长的实验用比格犬腹腔注射 1. 5×107 个 RH 株速殖子,每日 2 次检测直肠体温、采集口腔拭子、直肠拭子,感染 8 d 后(8 dpi)安乐死所有动物。 利用 PCR 检测拭子和血液中的弓形虫 B1 基因,利用荧光定量法检测 8 dpi 犬主要组织脏器中弓形虫 529 bp 重复片段的拷贝数,并对主要脏器进行组织病理学检测。 结果 结果表明 3 只实验犬在 4 ~ 5 dpi 均出现了一过性体温升高,轻微腹泻;2 ~ 6 dpi 的咽拭子或肛拭子中能检测到弓形虫 B1 基因的核酸,且肛拭子阳性率高于咽拭子;8 dpi 剖检后,均产生较多腹水;肝组织均出现明显的炎性变化;盲肠和肝中的弓形虫529 bp 片段的核酸拷贝数最高。 结论 利用 SPF 级比格犬腹腔接种弓形虫 RH 株,主要引起一过性体温升高和短时腹泻,可导致肝组织变性和坏死,发病模型较温和。


实验动物质控能力验证中酯酶-1 和转铁蛋白检测能力评价

王洪, 魏杰, 光姣娜, 周佳琪, 岳秉飞

2022, 39(3):  11-15.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 003

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目的 通过组织实施能力验证计划,帮助实验动物质量控制实验室发现问题,提高实验室质量控制水平。方法 依据 CNAS-CL03 能力验证提供者认可准则组织实施能力验证计划,样品通过均匀性和稳定性检验。参加单位在规定时限内提交检测结果和相关原始记录,将实验室结果与标准结果进行对比分析。 结果 共有 9 家实验室参加本次能力验证计划,其中 7 家实验室提交了满意结果,本次能力验证计划的满意率为 77. 78% 。 结论 实验动物质量控制实验室在酯酶-1 和转铁蛋白的整体检测水平较高,少数实验室存在提升空间。


CSF-1R 基因敲入小鼠模型的构建

刘甦苏, 吴勇, 谷文达, 曹愿, 翟世杰, 赵皓阳, 范昌发

2022, 39(3):  16-21.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 004

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目的 利用 CRISPR-Cas9 技术构建 CSF-1R 基因敲入小鼠模型。 方法 将人 CSF-1R 基因的 3 到 11 外显子 cDNA 的部分序列,加上 TGA 密码子及 WPRE-PolyA 原件,插入到了小鼠 CSF-1R 基因外显子 3 的第 20 位丙氨酸下游。 在鉴定获得阳性模型后,进一步通过 RT-qPCR 分析基因的表达特征并进行精子冷冻保种繁殖。 结果 该基因正确插入设计位点,转录水平显示转入基因能在小鼠模型心脏、肝、脾、肺、肾、脑等脏器中表达,冷冻精子复苏后体外受精的平均受精率达 67. 74% ,平均产仔率 16. 06% ,并经过 PCR 检测得到阳性小鼠。 结论 成功构建了人源化CSF-1R 基因敲入小鼠模型,为评价肿瘤免疫抗体药效及相关靶向抗肿瘤药物筛选提供了动物模型。


大黄素对大鼠非酒精性脂肪肝及肝组织 11β-羟基类固醇脱氢酶 1 表达的影响

孙红爽, 李鹏霖, 刘永双, 乜春城, 种宝贵

2022, 39(3):  22-26.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 005

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目的 观察大黄素对高热量饲料喂养所致大鼠非酒精性脂肪肝( NAFLD) 的治疗作用及对肝组织 11β-羟基类固醇脱氢酶 1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1,11β-HSDI)表达的影响。 方法 雄性 Wistar 大鼠 40 只,随机分为对照组、模型组、大黄素低剂量组( E1 组) 、大黄素高剂量组( E2 组) ,每组 10 只。 对照组给予普通饲料,其余 3 组喂以自制高脂饲料,从第 9 周开始治疗组给予大黄素干预治疗,第 14 周末实验结束,进行相关指标检测。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现了明显的 NAFLD 病变,且肝组织 11β-HSD1 表达增加;与模型组比较,大黄素治疗可以降低肝脏指数,降低肝功能指标 ALT、AST,降低血脂及肝脏脂质沉积,减轻肝组织脂肪变性、炎性反应及纤维化,同时显著降低肝组织 11β-HSD1 基因和蛋白表达量。 且以上治疗作用呈剂量依赖性。 结论 大黄素对NAFLD 有保护作用,其作用机制可能与抑制 11β-HSD1 活性有关。


乳双歧杆菌 V9 对小鼠免疫功能的影响及机制研究

马立艳, 孙伟

2022, 39(3):  27-32.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 006

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目的 评价乳双歧杆菌 V9( Bifidobacterium lactis V9)对小鼠免疫功能的调控作用,为其进一步的研发及利用提供实验依据。 方法 C57BL / 6J 小鼠随机分为 4 组,每组 10 只,分别灌胃给予双蒸水 0. 5、1. 0 和 3. 0 mg / kg 乳双歧杆菌 V9。 30 d 后处死小鼠,检测其脏器 / 体质量比。 通过脾淋巴细胞转化、迟发型变态反应来评估各组小鼠的细胞免疫情况;小鼠碳廓清能力和巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬功能测定来评估各组小鼠的单核-巨噬细胞功能;溶血空斑实验和血清溶血素水平测定来评估各组小鼠的体液免疫情况;乳酸脱氢酶( LDH)检测来评估各组小鼠的自然杀伤( NK)细胞活力。 结果 乳双歧杆菌 V9 对小鼠体质量、脾指数、胸腺指数均无显著影响( P> 0. 05) ;乳双歧杆菌 V9 可显著提高小鼠的脾淋巴细胞转化、碳廓清吞噬指数、单核-巨噬细胞功能、半数溶血值和 NK 细胞活力( P<0. 05) 。 结论 益生菌乳双歧杆菌 V9 可有效增强机体免疫功能。


实验室病毒检测能力验证与粪便样本中小鼠诺如病毒的检测

付瑞, 王莎莎, 王 吉, 李晓波, 王淑菁, 岳秉飞

2022, 39(3):  33-39.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 007

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目的 通过对国际实验动物科学理事会( the International Council for Laboratory Animal Science,ICLAS)能力验证计划( Performance Evaluation Program,PEP)提供的 4 份病毒盲样进行检测,从而对实验室病毒检测能力进行验证,进一步提高实验室的病毒检测水平。 方法 对 ICLAS 提供的盲样信息进行分析,提取核酸进行 PCR 检测并对阳性产物进行测序验证。 对诺如病毒阴性盲肠内容物进行不同倍数的稀释后,与诺如病毒培养液 1 ∶ 1 混合,使用两种不同的核酸提取试剂盒进行核酸提取,通过荧光定量 PCR 方法进行诺如病毒核酸检测,比较检测的核酸拷贝数。 结果 经过检测确定 ICLAS 提供的盲样分别为小鼠脑脊髓炎病毒、小鼠诺如病毒、小鼠轮状病毒以及小鼠乳酸脱氢酶增高症病毒。 比较不同稀释度的盲肠内容物诺如病毒荧光定量 PCR 检测结果发现,使用病毒 DNA / RNA提取试剂盒提取核酸,稀释度不高于 1 ∶ 16 时,检测结果相比于病毒对照出现不同程度的偏差,稀释度为 1 ∶ 32 时检测结果与病毒对照检测结果相近。 使用病毒 RNA 提取试剂盒提取核酸,稀释度不低于 1 ∶ 8 时,检测结果与病毒对照相近。 结论 通过国际比对能力验证,说明本实验室病毒检测能力可靠,且经过污染实验研究,粪便样本1 ∶ 8 稀释后使用病毒 RNA 提取试剂盒提取核酸为粪便中诺如病毒检测的最佳预处理方法。


不同因素对苹果酸酶-1 和异柠檬酸脱氢酶-1 标准样品的影响分析

魏杰, 王洪, 光姣娜, 周佳琪, 付瑞, 岳秉飞

2022, 39(3):  40-44.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 008

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目的 分析温度-时间、浓度、冻融、运输条件和不同品系来源对苹果酸酶-1( malic enzyme-1,ME-1) 和异柠檬酸脱氢酶-1( isocitrate dehydorgenase-1,IDH-1)标准样品的影响。 方法 制备 C57BL / 6、BALB / c 和 CBA 三种近交系小鼠来源的标准样品,经均匀性测定后,随机抽样按照 GB / T 14927. 1—2008 中的检测方法进行测试。 温度-时间因素以 4 ℃ 、室温( RT)和 37 ℃ 这 3 个温度为观测纵坐标,1、2、3、7、14 和 21 d 为观测纵坐标。 在每个坐标交点,每品系分别随机抽取两管。 浓度因素按照每品系一管进行原倍、1 / 2、1 / 4 和 1 / 8 倍进行梯度测试。 冻融因素,每品系 3管,-20 ℃ 冻存 2 h 至室温融化 3 次为条件测试。 所有实验均为相同的运输条件、干冰冷链及北京往返沈阳、西安、成都三地测试。 结果 不同品系来源标准样品在温度-时间、浓度、冻融和运输条件下无显著差异。 各标准样品21 d 内在 4 ℃ 及室温( RT)条件下,均能稳定存在,但 37 ℃ 仅能稳定存在 2 d。 原倍稀释至 1 / 8 浓度、3 次冻融和干冰运输三地往返后,样品检测结果显示稳定。 结论 制备的 ME-1 和 IDH-1 标准样品具备均一性、稳定性和可比性,满足能力验证计划需求。


乙二醇热回收装置在实验动物设施运行中的节能效果

闫辰, 尚晓松, 孙 波, 刘 欣, 李学勇

2022, 39(3):  45-50.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 009

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目的 统计分析乙二醇热回收装置在实验动物设施全年运行中的节能效果。 方法 利用设施配备的自控软件组态王,记录设施新风温度、新风相对湿度、热交换后的空气温度、热交换后的空气相对湿度等原始数据。 并通过热交换数据进行分析,计算出新风焓值 H1( kJ / kg) 、热交换后空气的焓值 H2( kJ / kg) 、每个时间点的热量回收值及每个时间点的热量回收值所对应的电量消耗值。 结果 在室内温度保持在( 24. 0± 2. 0) ℃ 、室内相对湿度保持40% ~ 70%的状态下,当室外日均气温高于 26. 15 ℃ 或低于 17. 30 ℃ 时,该装置节省的能量要高于其自身的能耗;当室外日均气温在 17. 30 ℃ 至 26. 15 ℃ 时,该装置节省的能量则要低于其自身的能耗。 结论 在实验动物设施通风空调系统中应用乙二醇热回收装置的确能够实现节能运行,但在节省的能量低于其自身的能耗时应当停止该装置的运行,从而达到有效降低运行成本的最终目的。


一项乳酸菌混合菌粉28d经口喂养的毒性研究

房晓, 段荣帅, 张晓元, 张艳艳, 孙晓康, 陈 磊

2022, 39(3):  51-56.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 010

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目的 通过研究一种复合混合菌粉的 28 d 经口毒性,为其作为保健品的开发和制备提供安全性依据。 方法 分别灌胃给予雌、雄大鼠不同剂量的乳酸菌 R9639+Zhang+P9+V9+P-8+XLTG11 混合菌粉,连续 28 d,旨在观察不同组中动物基本情况、体质量、血液学检查、脏器指数和重要脏器病理学状态等。 结果 灌胃给予不同剂量的混合菌粉后,各组大鼠的体质量、摄食量、食物利用率、血液学检查及尿常规等指标未发现明显的改变;脏器指数、重要脏器的组织病理形态均无显著差异。 结论 28 d 经口毒性研究结果表明,该混合菌粉对大鼠无显著毒性,具有良好的安全性。


技术

骨质疏松症动物模型中大鼠卵巢切除手术要点及其术后护理

马艳芳, 张鑫, 李慧, 程 东, 孙昌华

2022, 39(3):  57-62.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 011

摘要 ( )   PDF (12379KB) ( )  

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目的 建立并探讨骨质疏松症大鼠卵巢切除手术要点及其术后护理,为动物模型的成功建立提供参考依据。方法 通过外科手术方法对大鼠应用卵巢切除手术构建动物模型,动物模型的设计应符合相似性、可靠性、重复性、适用性、可控性、易行性和经济性的原则。 结果与结论 动物模型的建立在研究骨质疏松方面极其重要,合理的选择动物模型对实验的结果起着关键作用。 大鼠是骨质疏松动物模型最常选用的动物。


动物实验中兔的不同处死方法的统计分析(2017—2021 年)

李硕磊, 刘继超, 张孟蕾, 牛屹东

2022, 39(3):  63-66.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 012

摘要 ( )   PDF (718KB) ( )  

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目的 统计国内动物实验中兔处死方法使用情况,为实验动物管理部门了解“安乐死” 方法在国内的执行情况、制定相应政策并实施管理提供参考和依据,同时为相关学术杂志加强审核论文撰写中兔的“ 安乐死” 方法提供参考,确保动物福利在国内的有效落实。 方法 在知网数据库中检索 2017—2021 年正文中含有检索词“ 兔” “ 处死”和“兔” “安乐死”的文献,用 Excel 对符合纳入条件的文章进行统计分析。 结果 在本文调查的 367 篇文献中,有 315 篇文献中未明确描述兔处死方法,占比高达 85. 83% (315 / 367) 。 仅有 52 篇文献明确提出了兔的处死方法,占 14. 17% (52 / 367) ,其中有 32 篇文献使用了空气栓塞法,占 61. 54% (32 / 52) ;有 12 篇文献使用了过量麻醉法,占23. 08% (12 / 52) ;有 6 篇文献使用了颈椎脱臼法,占 11. 54% ( 6 / 52) ;二氧化碳窒息法有 1 篇,占 1. 92% ( 1 / 52) ,52篇文献中仅有 11 篇描述的处死方法符合“安乐死”方法,占比 21. 15% (11 / 52) 。 结论 目前国内动物实验中兔“安乐死”实施情况不容乐观,并且兔处死方法在写作中被忽视情况严重,且存在描述不规范的情况。 我国科研人员的动物福利意识有待提高,论文书写过程中对动物 “ 安乐死” 的描述有待完善, “ 安乐死” 相关法律法规有待严格落实。


无菌鼠模型制作方法与评价

李建香, 王君君, 黄天马, 张子健, 过伟峰

2022, 39(3):  67-69.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 013

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无菌动物特别是无菌大鼠、小鼠的成功培育技术成为研究微生物与人类生命现象关系的关键技术。 严格的无菌动物是指在动物体宿主内外任何部位及生活环境中均检测不出一切生命体。 广义的无菌动物还包括清除肠道中大部分菌群的动物,又称为伪无菌动物。 目前制作无菌鼠的方法主要有剖腹取胎无菌饲养法制作无菌鼠模型,抗生素鸡尾酒法制作伪无菌鼠模型。 本文对无菌鼠模型的制作方法进行总结并对其优缺点进行评价。


综述

小鼠心脏移植排斥反应抑制的研究进展

郭磊, 唐一鑫, 魏 然, 辛本凯, 朱翠琳, 张纪周

2022, 39(3):  70-73.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 014

摘要 ( )   PDF (712KB) ( )  

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心脏移植是治疗终末期心力衰竭的唯一办法,术后需要接受长期的免疫抑制治疗,但无法有效阻止移植后排斥反应的发生。小鼠心脏移植模型是研究移植免疫学的重要方法,在小鼠心脏移植后给予免疫抑制剂治疗,能够延长心脏同种异体移植物的存活,但同时发现免疫抑制剂的使用具有严重的不良反应。 本文将对小鼠心脏移植后采取的不同的免疫抑制治疗进行综述。


丁酸钠对细胞凋亡和实验动物影响的研究进展

王浩然, 廖轶, 姚娇, 赵德明, 周向梅

2022, 39(3):  74-78.  DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2022. 03. 015

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丁酸钠是丁酸加工成钠盐形式,丁酸钠具有抗感染、提高机体免疫力、稳定肠道菌群等功效,文中结合近年来国内外的研究进展,重点总结了丁酸钠诱导机体细胞凋亡的具体机制,包括丁酸钠激活死亡受体通路、线粒体通路和内质网应激通路等。并探讨了丁酸钠改善疾病动物模型的具体机制。希望为丁酸钠在疾病预防和治疗中提供新的思路。