实验动物科学 ›› 2023, Vol. 40 ›› Issue (6): 59-66.DOI: 10. 3969 / j. issn. 1006-6179. 2023. 06. 011
摘要： 目的 利用腺相关病毒 9(AAV9)介导的 CRISPR / Cas9 系统构建成体心肌细胞特异性 Oga 基因敲除小鼠模型,来研究内源性 OGA 在成体心脏稳态维持中的功能。 方法 首先,筛选靶向 Oga 编码区的有效 sgRNA,构建包装表达有效 sgRNA 的 AAV9 病毒。 其次,建立心肌细胞特异性 SpCas9 表达小鼠 ( α-MHCCas9) ,并通过腹腔注射方式将 AAV9-sgOga 注射到小鼠体内。 通过 qPCR 和 Western blot 印记杂交实验检测 Oga 的表达情况,确定 Oga 敲除是否成功。 最后,通过组织学分析心脏结构,以及超声心动图分析心脏功能,来分析 Oga 对心脏稳态维持的影响。结果 筛选到 2 条可以有效靶向 Oga 编码区的 sgRNA,通过 AAV9 递送实现了 Oga 基因在心脏组织的有效敲除,且导致 O-GlcNAcylation 表达显著上升;组织学分析和超声心动图分析发现基因敲除小鼠心脏结构及功能在基础水平与对照小鼠无显著变化。 结论 利用 AAV9 介导的 CRISPR / Cas9 系统成功建立了成体心肌细胞 Oga 基因敲除的小鼠模型,为研究 OGA 介导的 O-GlcNAcylation 清除在心脏稳态维持中的功能和机制提供了有效的小鼠模型。
中图分类号:
